[发明专利]一种RGD靶向树状纳米粒标记物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种放射性标记物的制备方法，特别涉及一种RGD靶向树状纳米粒标记物的制备方法。

背景技术

近年来癌症（Cancer）已成为一个严重的社会问题和公众关心的健康焦点。《2012中国肿瘤登记年报》显示，我国近20年来癌症呈现年轻化及发病率和死亡率“三线”走高的趋势。全国肿瘤死亡率为180.54/10万，每年因癌症死亡病例达270万例。包括乳腺癌、肺癌、结肠癌、甲状腺癌等发病年龄均低于此前年龄。目前，新型肿瘤分子探针已成为诊断及治疗肿瘤的重要工具。各类肿瘤分子探针介导的靶向诊断与治疗，已成为分子影像研究中的热点。

在以往的研究中，以放射性标记分子探针为代表的放射性分子靶向治疗一直是肿瘤治疗的研究方向之一。而在目前投放在临床的放射性药物中主要以^99mTc-MDP、^99mTc-MIBI、¹⁸F-FDG、 ¹⁸F-Fallypride、 ¹¹C-蛋氨酸、¹¹C-胆碱、¹¹C-乙酸盐等SPECT/PET显像药物为主。各种各样的肿瘤分子探针也正在研究阶段，有待进一步开发完善。但在目前来说，放射性的药物探针有待解决及提高的主要有以下这三个问题：第一，稳定性难以持续；第二，特异性靶向不高；第三，显像和治疗不能同时兼顾。

迄今，纳米粒子作为载体运载和递送的物质已经涉及核酸、多肽、蛋白质、放射性核素、化疗药物、光敏性分子、荧光探针分子等众多种类，在疾病的早期检测与诊断和治疗方面展示出巨大的应用前景和经济价值。目前正在研究的应用于分子诊断的纳米探针包括金纳米颗粒、量子点、磁性纳米颗粒、树状纳米粒、DNA纳米机器、发射近红外的聚合体和纳米生物传感器等。这些探针主要集中在肿瘤的显像诊断和放射治疗方面。树状纳米粒可用于药物输送，检测癌细胞凋亡，靶向用药和肿瘤成像。这类形状、大小完全可控的单扩散性的聚合物纳米粒子的经典代表是聚酰胺-胺(PAMAM)。PAPAM 分子表面存在大量的氨基，可以很容易的和各种化合物反应连接，如靶向分子、药物分子等。PAMAM 内部还含有大量的疏水空腔，可以通过非共价作用包裹疏水的药物分子。PAMAM 的分子量较大，不会像小分子一样很快通过肾代谢掉，可以在血液中停留较长的时间，增加各器官的吸收。由于PAMAM表面具有大量的活性基团，可以通过双功能螯合剂连接多个放射性核素和靶向分子，因此在低浓度条件下可形成对比度很高的诊断影像。近来，PAMAM在肿瘤诊断和治疗中的应用研究吸引了越来越多的研究者的关注，目前这个方向已经发展成为纳米医药，是药物运输系统以及制药科学中的一个研究热点。

在目前的以RGD为靶向的纳米分子药物当中，RGD要与纳米分子结合所必须要通过一个“桥梁”，如NHS-PEG-MAL、HYNIC（hydrazinonicotinic acid, 肼基烟酸）等双功能螯合剂。RGD只是作为一个靶向分子，当它需要与纳米粒相连前，大多数需要进行硫醇化才能与所谓的“桥梁”连接，从而连接到纳米粒上，不仅增加了反应步骤，还降低药物合成的稳定性。再者，目前合成的靶向纳米粒要不大多只有单一的显像功能（如¹⁸F、^99mTc、Cy5.5等），要不就只是通过载药（DOX、PTX等）进行肿瘤靶向治疗，同时具有两种功能的纳米粒研究较少。

发明内容

本发明的目的在于提供一种RGD靶向树状纳米粒标记物的制备方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种RGD靶向树状纳米粒的制备方法，包括如下步骤：

将RGDyC和双功能PEG与溶剂中混合，通过点击反应生成NHS-PEG-RGDyC，其中双功能PEG中乙二醇单元数n为40～120之间的整数；

将NHS-PEG-RGDyC、PAMAM纳米粒混合，使NHS-PEG-RGDyC与PAMAM纳米粒上的胺基反应共价连接，得到PAMAM-PEG-RGDyC。

作为上述制备方法的进一步改进，RGDyC与双功能PEG反应的pH为5～7。更佳的，RGDyC与双功能PEG反应的pH为6。

作为上述制备方法的进一步改进，RGDyC与双功能PEG反应的溶液为NaAc-HAc溶液。

作为上述制备方法的进一步改进，NHS-PEG-RGDyC和PAMAM纳米粒反应的pH为8～10。

作为上述制备方法的进一步改进，NHS-PEG-RGDyC和PAMAM纳米粒反应的溶液为硼砂-NaOH溶液。