[发明专利]一种肌肉组织损伤修复动物模型的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及动物模型构建领域，具体涉及一种肌肉组织损伤修复动物模型的建立方法。

背景技术

成年个体组织中的干细胞在正常情况下大多处于休眠状态，当机体发生一系列损伤如创伤、炎症、变性病等消耗性疾病时，在病理状态或在外因诱导下，组织能够保持一定程度的再生能力。肌肉组织具有自己的前体细胞，即肌卫星细胞，附着于肌细胞表面的肌卫星细胞具有干细胞性质，当肌细胞受损后，肌卫星细胞可增殖分化，参与肌细胞结构和功能的修复，但是其中具体的分子机制目前尚不清楚。作为肌肉组织工程重要的研究工具，肌肉组织损伤修复动物模型在肌肉组织再生研究中具有重要意义。

目前肌肉组织工程中常用的动物模型包括遗传性肌病模型、失神经模型、冷冻模型等，但是它们存在不同程度的缺点，如模型不稳定、费用较高、损伤不确切(遗传性肌病)，失神经支配影响再生研究、建模周期长(失神经模型)或损伤范围不易控制(冷冻模型)。所以我们期望能够建立简单易行、费用低、造模时间短、模型稳定、损伤确切、范围精确可控的技术方法，并且满足摧毁肌肉细胞的同时保留细胞外基质结构的要求。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种肌肉组织损伤修复动物模型的建立方法，该建立方法建立简单易行、费用低、造模时间短、模型稳定、损伤确切、范围精确可控，并且能够满足在摧毁肌肉细胞的同时保留细胞外基质结构的要求。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现。

一种肌肉组织损伤修复动物模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，将模型动物麻醉后，以俯卧位固定，并对麻醉后模型动物的后肢进行消毒；

步骤2，手术依次切开消毒后后肢的皮肤、皮下组织，显露腓肠肌并分离腓肠肌的下段；

步骤3，显露一侧腓肠肌后，使用电极夹持所述一侧腓肠肌，并对所述一侧腓肠肌施加脉冲电场，即建立得肌肉组织损伤修复动物模型。

优选地，步骤3中，所述脉冲电场的参数为：电场1500V/cm，频率3Hz，脉冲长度70μs。

优选地，步骤3中，所述施加脉冲电场的个数为200个。

优选地，步骤1中，所述模型动物为实验鼠。

电穿孔是细胞膜在外电场作用下形成一种可视为微孔的亲水性通道，平时难以穿过细胞膜进入细胞内部的大分子(如化疗药物)便可通过该通道进入细胞内。在外加电场取消后，若微孔能够闭合，则称为可逆电穿孔，若电场强度达到一定程度微孔不能自我修复，则称为不可逆电穿孔，直接导致细胞死亡。由于电场直接作用于细胞膜结构，仅针对细胞水平进行灭活，所以对于细胞外基质结构能够很好的保存。本发明依据不可逆电穿孔的作用原理，在对动物肌肉组织施加不可逆电穿孔处理后，接受电场处理的肌组织细胞能够有效的完全灭活，且细胞外基质结构完全不受操作的影响，能够满足肌肉组织损伤修复研究的需要。本发明应用不可逆电穿孔建立肌肉组织损伤修复动物模型，能够提供简单易行、费用低、造模时间短、模型稳定、损伤确切、范围精确可控的技术方法，能够在满足摧毁肌肉细胞的同时保留细胞外基质结构的要求。

附图说明

下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步详细说明。

图1为对6周龄雌性大鼠的腓肠肌组织在电脉冲处理1天后的组织病理学分析结果图；

图2为对6周龄雌性大鼠的腓肠肌组织在电脉冲处理3天后的组织病理学分析结果图；

图3为对6周龄雌性大鼠的腓肠肌组织在电脉冲处理1周后的组织病理学分析结果图；

图4为对6周龄雌性大鼠的腓肠肌组织在电脉冲处理3周后的组织病理学分析结果图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域的技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。

本发明提供了一种肌肉组织损伤修复动物模型的建立方法，包括以下步骤：

步骤1，将模型动物实验鼠麻醉后，以俯卧位固定，并对麻醉后实验鼠的后肢进行消毒；

步骤2，手术依次切开消毒后后肢的皮肤、皮下组织，显露腓肠肌并分离腓肠肌下段；

步骤3，显露一侧腓肠肌后，使用电极夹持所述一侧腓肠肌，并对所述一侧腓肠肌施加脉冲电场，即建立得肌肉组织损伤修复动物模型。

具体地，本实施例通过本发明提供的肌肉组织损伤修复动物模型的建立方法建立幼年SD大鼠及老龄SD大鼠肌肉损伤修复过程中的蛋白基因表达差异，具体按照以下步骤进行：