[发明专利]一种以下胚轴为外植体的红椿再生方法

权利要求书

1.一种以下胚轴为外植体的红椿再生方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、外植体的获得：将红椿种子去掉双侧翅，在水中浸泡3～5h，经消毒后将种子播种于固体MS培养基上培养得到无菌苗，切取无菌苗的下胚轴作为外植体；培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d；

B、芽的诱导及伸长：将下胚轴接种到芽诱导培养基上培养诱导愈伤组织，接种时下胚轴平铺于培养基；培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d；培养至外植体上分化出芽点时，将长芽的外植体转移到芽伸长培养基上在相同培养条件下培养诱导不定芽伸长；

所述的芽诱导培养基：每升含有6-BA 0.3～0.8mg、KT 0.5～1.5mg、IBA0.05～0.15mg、蔗糖30g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH 5.8～6.0；

所述的芽伸长培养基：每升含有6-BA0.05～0.2mg、NAA 0.1～0.3mg、蔗糖30g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH 5.8～6.0；

C、生根培养：待不定芽伸长到3～5cm时，切取不定芽，接种于生根培养基上培养诱导生根，得到生根苗；培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d；

所述的生根培养基：每升含有NAA0.1～0.3mg、蔗糖15g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH5.8～6.0；

D、炼苗及移栽：将生根苗炼苗后从培养瓶中挖出，洗净根上的培养基，将生根苗在自来水中浸泡1h，移栽到泥炭土上，进行栽培管理，得到红椿植株。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤A的消毒是将红椿种子用体积分数75％乙醇水溶液灭菌1min，无菌水冲洗1次，质量分数10％次氯酸钠水溶液灭菌15～20min，无菌水冲洗3～5次。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤D的炼苗是打开培养瓶盖让生根苗适应1d。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤D的泥炭土是高温灭菌过的泥炭土。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤A的固体MS培养基每升含有蔗糖30g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH 5.8～6.0。