[发明专利]一种多通道荧光相关光谱的多聚体检测数据处理方法

权利要求书

1.一种多通道荧光相关光谱的多聚体检测数据处理方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)从原始光子流数据中分别统计单脉冲发n个光子的频数分布N_n-raw、连续双脉冲第一个脉冲发i个光子，第二个脉冲发j个光子的频数分布N_ij-raw；

(2)将从原始光子流数据统计得到的频数分布作去检测器影响处理，得到单脉冲真实发光光子数频数分布N_n-true和连续双脉冲真实发光光子数频数分布N_ij-true；

(3)对真实发光光子数频数分布利用总累积测量时间t和激发光频率f进行归一化计算，得到单脉冲发光概率p_n-pulse和双脉冲发光概率p_ij-pulse；

(4)求解单脉冲发光概率p_n-pulse和双脉冲发光概率p_ij-pulse与多聚体物种浓度c联立所得方程组，从而获得多聚体系中各物种的浓度分布信息。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在激光共聚焦区域内，一个荧光分子在共聚焦微区点(x,y,z)处的发光概率I(x,y,z)为：

荧光分子在样品体系中的平均发光概率I_mean为：

其中w_xy和w_z是共聚焦体系点扩散函数中x-y平面和z轴向半径，V为溶液样品的体积，V₀为共聚焦体积；I₀＝ρ₀σQη，ρ₀为共聚焦中心处的光子密度，σ为分子吸收截面积，Q为荧光量子产率，η为包含物镜效率、检测器效率和光学元件效率的检测效率。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，采用分子动力学模拟荧光标记多聚体在溶液中扩散并被激发发射荧光光子的过程，并模拟八通道单光子计数器生成光子数据流，统计得到单脉冲下发光光子数频数分布N_n-raw和双脉冲下发光光子数频数分布N_ij-raw。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，由于单光子检测器的死时间影响，当多于一个的光子进入同一通道时，每个检测器单个脉冲内只能检测到一个光子，因此检测器检测到的光子个数信息存在偏差，需要作去检测器影响处理，即检测到的单脉冲下发光光子数频数分布N_n-raw与共聚焦区域内的荧光分子实际发出的单脉冲真实发光光子数频数分布N_n-true有如下校正关系：

其中为第二类stirling函数，符号A和C分别表示数学上的排列和组合，由式(3)推导出去检测器影响后的单脉冲真实发光光子数频数分布N_n-true为：

连续双脉冲下发光光子数频数分布N_ij-raw与连续双脉冲真实发光光子数频数分布N_ij-true分别由单脉冲下发光光子数频数分布N_n-raw和单脉冲真实发光光子数频数分布N_n-true统计得到。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，将得到的真实发光光子数频数分布进行如下归一化计算，得到单脉冲发光概率p_n-pulse和双脉冲发光概率p_ij-pulse；

其中t为分子动力学模拟光子流数据总累积时间，f为激发光频率。