[发明专利]一种豌豆SSR指纹图谱的构建方法

权利要求书

1.一种用于鉴别豌豆品系或其野生近缘种的分子标记组合，其特征在于，含有19个基因组SSR分子标记和12个EST-SSR分子标记，分别为SSR4825、SSR4696、SSR28304、SSR24036、B83、EST671、SSR27844、SSR25888、SSR24882、SSR23759、SSR21491、EST619、SSR24112、EST599、SSR22754、P14、SSR24731、SSR25334、EST876、SSR28967、SSR21399、SSR21405、P282、EST643、SSR25799、SSR25965、P291、P292、SSR22052、P344、EST617；

所述分子标记分别通过以下引物对扩增得到：SEQ ID NO.1-2、SEQ ID NO.3-4、SEQ IDNO.5-6、SEQ ID NO.7-8、SEQ ID NO.9-10、SEQ ID NO.11-12、SEQ ID NO.13-14、SEQ IDNO.15-16、SEQ ID NO.17-18、SEQ ID NO.19-20、SEQ ID NO.21-22、SEQ ID NO.23-24、SEQID NO.25-26、SEQ ID NO.27-28、SEQ ID NO.29-30、SEQ ID NO.31-32、SEQ ID NO.33-34、SEQ ID NO.35-36、SEQ ID NO.37-38、SEQ ID NO.39-40、SEQ ID NO.41-42、SEQ ID NO.43-44、SEQ ID NO.45-46、SEQ ID NO.47-48、SEQ ID NO.49-50、SEQ ID NO.51-52、SEQ IDNO.53-54、SEQ ID NO.55-56、SEQ ID NO.57-58、SEQ ID NO.59-60、SEQ ID NO.61-62所示的引物。

2.一种引物组合，其特征在于，含有以下31对特异性引物对，其核苷酸序列分别如SEQID NO.1-62所示。

3.含有权利要求2所述引物组合的试剂盒。

4.权利要求2所述的引物组合或权利要求3所述的试剂盒在鉴定豌豆品种中的应用。

5.权利要求2所述的引物组合或权利要求3所述的试剂盒在豌豆辅助育种中的应用。

6.一种豌豆SSR指纹图谱的构建方法，其特征在于，以权利要求2所述的引物组合对不同豌豆品系或其野生近缘种的DNA进行PCR扩增，对PCR产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测或对PCR产物进行荧光毛细管电泳检测：

纯合位点的等位变异大小数据记录为X/X，其中X为该位点等位变异的大小；

杂合位点的等位变异数据记录为X/Y，其中X、Y为该位点上两个不同的等位变异；

无效等位变异的大小记录为0/0；

上述“/”前为小片段，“/”后为大片段；

通过对不同位点的数据整合，形成不同豌豆的SSR指纹图谱。

7.如权利要求6所述的构建方法，其特征在于，PCR扩增方法为：

反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性35s，54℃退火40s，72℃延伸45s，共35个循环；72℃延伸5min，10℃保温5min；

10μL扩增体系为：2×Taq PCR Master Mix 5μL，2μM/μL的上、下游引物各1μL，DNA模板1.5μL，ddH₂O 2.5μL。