[发明专利]HIV重组抗原、表达基因、表达载体以及HIV检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种能够用于检测HIV‑O亚型的HIV重组抗原，表达该HIV重组抗原的表达基因和表达载体，以及含有该HIV重组抗原的HIV检测试剂盒。HIV重组抗原，包括依次连接的HIV‑1型段、HIV‑2型段和HIV‑O亚型段；所述HIV‑O亚型段为由SEQ ID No.3所示的核苷酸序列编码得到的多肽。这种HIV重组抗原中含有HIV‑O片段，从而可以用于检测HIV‑O亚型。在具体的试验中，包括这种HIV重组抗原的HIV检测试剂盒在检测HIV‑O亚型时表现出较高的特异性和灵敏性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种HIV重组抗原、表达基因、表达载体以及HIV检测试剂盒。

背景技术

自1982年命名获得性免疫缺陷病综合症(AIDS)以来，HIV(Humanimmunodeficiency virus)的感染在全球广泛流行，严重威胁着人们的生命健康，因此，必须对HIV感染进行监控。为了尽早、尽快发现感染者《国务院关于进一步加强艾滋病防治工作的通知》国发【2010】48号明确提出要进一步加强监测检测网络建设依托现有医疗卫生资源配备必要的设备和人员扩大检测服务范围，推广使用快速简便的检测方法提高检测可及性。有鉴于此，研发简便、准确、快速的检测产品，及早检测艾滋病病毒感染，杜绝艾滋病的传播成为预防控制艾滋病的首要手段。

目前国内外用于检测艾滋病的方法有酶联免疫吸附实验、胶体金检测技术、免疫印迹检测技术、核酸检测技术和生物芯片检测技术。

酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)：是免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，加入标本，洗涤，加入酶标记抗原，使抗原抗体反应在固相表面进行，用于测定HIV特异抗体。

胶体金检测技术(Colloidal-Gold Test)是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，能够用于快筛查，但有一定的缺陷如灵敏度不够等等。

免疫印迹检测技术(Immunoblotting)又称蛋白质印迹(Western blotting)，是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该方法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫技术。由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术，但比较耗时。

核酸检测技术(Nucleic Acid Test，NAT)是利用分子生物学的理论和技术，它的目标分子是DNA或RNA，通过直接探查病毒核酸的存在与否，从而对人体状态与疾病做出诊断的方法，但其对标本及核酸扩增酶的灵敏度及特异性要求较高，目前国内外还没有大量普及。

生物芯片检测技术(Bio-chip Test)是通过缩微技术，根据分子间特异性地相互作用的原理，将生命科学领域中不连续的分析过程集成于硅芯片或玻璃芯片表面的微型生物化学分析系统，以实现对细胞、蛋白质、基因及其它生物组分的准确、快速、大信息量的检测，但价格昂贵不适合普查。

每种检测技术各有优缺，ELISA检测因为其操作简单、灵敏度和特异性好、成本低廉、检测时间短等特点，已经被各大血站、血液制品厂、医院等医疗结构所普遍采用，是应用最广的一项检测技术。

按照检测原理，ELISA可以分为间接法、夹心法、捕获法、竞争抑制法等。根据试剂所用抗原的来源以及检测试剂的类型，可将HIV酶联免疫检测试剂的发展分为4个阶段。