[发明专利]一种肛瘘补片或栓、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种脱细胞异体真皮基质的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，将异体皮原料投入盛有蛋白酶溶液的容器中，浸泡振荡处理，得半成品A；

步骤二，将半成品A投入盛有含有表面活性剂和高渗盐溶液的容器中，超声浸泡处理；更换表面活性剂和高渗盐溶液，超声浸泡处理；重复该操作多次，得半成品B；

步骤三，将半成品B用生理盐水浸泡，振荡处理，得半成品C；

步骤四，将半成品C投入盛有交联剂溶液的容器中，浸泡, 得半成品D；

步骤五，将半成品D取出投入盛有生理盐水溶液容器中浸泡，得半成品E；

步骤六，将半成品E投入盛有DNA水解酶溶液的容器中，浸泡处理，得半成品F；

步骤七，将半成品F用生理盐水浸泡振荡处理，得半成品G；

步骤八，将半成品G取出，用氨基酸溶液浸泡后，投入盛有生理盐水溶液容器中，静置，得半成品H；

步骤九，将半成品H取出，包装，灭菌，得成品I；

其中，所述脱细胞异体真皮基质取材于人体皮肤组织；

所述蛋白酶溶液为0.2 w/v %胰蛋白酶-dispase酶溶液，其中，胰蛋白酶与dispase酶的质量比是2:1，溶液pH值为7.0-8.0；或所述蛋白酶溶液为0.3 w/v %胰蛋白酶-木瓜蛋白酶溶液，其中，胰蛋白酶与木瓜蛋白酶的质量比为2.5:1，溶液pH值为6.0-8.0；或所述蛋白酶溶液为0.2w/v%胰蛋白酶-菠萝蛋白酶溶液，其中，胰蛋白酶与菠萝蛋白酶的质量比为1:1，溶液pH值为7.0-8.0；

其中表面活性剂和高渗盐溶液的配方是含有0.2g/L聚乙二醇与SDS，或含有0.2g/L聚乙二醇与Triton X-100的高渗盐溶液，其中，聚乙二醇选择分子量1000-2000，聚乙二醇与SDS或Triton X-100的质量比为1:1~3:2，高渗盐为50mM tris-HCl，1M氯化钠和10mM EDTA；

其中，交联剂溶液的配方是用京尼平与选自戊二醛、1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺、一水吗啉乙磺酸任一作为交联剂，其中京尼平与另一交联剂的质量比为3-6:1；交联剂与异体皮原料质量比为0.6-0.9:1；

其中DNA水解酶溶液的配方是DNA水解酶浓度为5-6g/L，pH7.0-8.0；

其中氨基酸溶液由甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸和谷氨酸配制而成，氨基酸浓度为1.5-2g/L；其中，由甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、谷氨酸按照3-4:1.1-1.3:1.0-1.6:0.96-1.16:0.07-0.08质量比配制；

其中步骤一中的浸泡振荡为浸泡3-6小时，振荡转速为50-200rpm，重复操作1-3次；

步骤二中的超声浸泡条件为：30-60KHz，100-400W，超声5-10分钟，浸泡2-4小时，重复2-4次；

步骤三中的振荡处理条件为振荡2小时，更换生理盐水，继续振荡处理，重复该操作4-6次；

其中步骤四中的浸泡时间为3-6h；

步骤五中的浸泡时间为8小时，浸泡次数为6-9次，浸泡温度为5-10℃；

其中步骤七的条件为生理盐水浸泡10-12小时，振荡处理；更换生理盐水，振荡处理，重复该操作2-4次。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脱细胞异体真皮基质的缝合强度为16N-20N、拉伸强度为3.0MPa -7.0MPa、拉伸伸长率为10%-28.9%。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤一、三、七中振荡转速为50-200rpm。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述氨基酸溶液中氨基酸浓度为1.5g/L，由甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、谷氨酸按照3.3:1.1:1.3:0.96:0.07质量比配制。

5.如权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，其中步骤九的包装为将半成品H装入包装袋中，封口包装完毕；所述灭菌为钴-60照射，照射剂量为20-30kGy。

6.一种肛瘘补片的制备方法，其特征在于，将权利要求1-5任一项所述方法获得的脱细胞异体真皮基质按照实际需要制备成肛瘘补片。