[发明专利]运用表观遗传修饰调控发酵微生物的方法

说明书

本发明提供了一种运用表观遗传修饰调控发酵微生物的方法，即通过添加组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA（曲古抑菌素A）进行表观遗传修饰调控发酵。有益效果为：运用表观遗传修饰调控后的发酵微生物，由于激活沉默基因表达，代谢产物抑制鳗弧菌活性显著提高、次生代谢产物明显丰富。

技术领域

本发明涉及生物科技领域，具体是一种运用表观遗传修饰调控发酵微生物的方法。

背景技术

舟山海水养殖业主要围绕大黄鱼、梭子蟹、对虾、贻贝和黑鲷等特色优势品种，以浅海养殖、围塘养殖为主。随着养殖规模的扩大，养殖强度不断增加，养殖生态环境也在不断恶化，同时，水产养殖业的病害日趋严重，给渔民造成了较大的经济损失。其中大规模水产养殖的主要病害就有由鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染引起的弧菌病，此病传染快速、感染率高，死亡率更是高达90%。目前，鳗弧菌已在欧洲、北美、日本等10多个国家肆虐，40多种海水养殖品种遭受鳗弧菌的侵袭，其中最重要的养殖品种有贝类、鲑鱼、虹鳟、鳗鲡、香鱼、鲈鱼等贝类、鱼类都受其侵害。鳗弧菌病在淡水养殖中具有同在海水养殖中同样高的发病率和高致死率，造成养殖区的严重减产和水体污染，给渔民带来巨大的经济损失。当前对于控制鳗弧菌病的应对策略主要是防重于治，如：疫苗预防、益生菌添加、非特异的免疫制剂等方式代替药物治疗，因为鳗弧菌病一旦发生，治疗有一定的困难，鱼苗和幼鱼的治疗尤为不便。而目前的化学药物主要以抗菌肽及其他抗生素药物为主，例如：在挪威，鳕鱼弧菌病的治疗主要使用奥索利酸和氟苯尼考，但效果都不理想，并会引起水环境的污染、抗生素的生物累积和致病菌耐药性的产生。因此，寻找一种高效低毒、对水环境无污染、不易产生耐药性又可以有效抑制鳗弧菌而又不对水产品产生毒副作用的药物，对海水养殖抵抗鳗弧菌病害、增加养殖品的成活率、提高产量、对实现渔民创收增收方面具有重要意义。

浒苔(Enteromorpha prolifera)为绿藻门(Chlorophyta)、石莼目(Ulvales)石莼科(Ulvaleae)浒苔属(Enteromorpha)植物，是一种药食两用的广布于近海滩涂中的天然野生大型绿藻，具有清热解毒之功效。近年来，全国多地近海水域每年都会产生大规模的浒苔爆发性生长，形成“绿潮”，给海洋水产养殖业和沿海观光业造成重大损失。但“绿潮”能向环境中分泌化学物质，从而抑制赤潮微藻的生长。浒苔共附生微生物能分泌抑藻抑菌的物质，抑制机制为通过阻断呼吸链、抑制细胞壁合成、抑制孢子的形成。但在自然发酵的情况下浒苔共附生微生物分泌抑藻抑菌的物质量少，且活性不大。

遗传信息从DNA到RNA再到蛋白质的传递是受一系列复杂调控因子控制的，他们主要负责调控细胞的转录和翻译过程。这些重要的调控机制在天然产物次生代谢产物合成机制中也扮演重要调控角色。微生物都具有很多次生代谢产物生物合成的编码基因，然而只有一小部分小分子产物在实验室条件下被检测到，而大多数编码基因处于沉默状态。因此，寻找新方法如基因克隆、诱变处理、菌株或种间自然接合、原生质体融合等方法激活沉默基因表达，使真核微生物代谢产物多样性和新颖性充分表达出来，是天然产物化学中的一个热门课题。

现有技术如授权公告号为CN103459592B的中国发明专利，公开了一种亚全能干细胞产品及其表观遗传修饰标签，诱导生成亚全能干细胞产品的方法以及干细胞分化潜能的表观遗传修饰标签鉴定。还提供了一种亚全能性基因和/ 或分化相关基因的组蛋白修饰状态作为预测干细胞分化潜能的表观遗传学修饰标签的用途。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能诱导浒苔共附生微生物次生代谢产物丰富，产物活性大的运用表观遗传修饰调控发酵微生物的方法。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：

本发明采用的土曲霉保藏号为：No. KP295961。

运用表观遗传修饰调控发酵微生物的方法，具体步骤为：