[发明专利]一种胃肠动力障碍动物模型的制备方法

权利要求书

1.一种胃肠动力障碍动物模型的制备方法，采用SPF级7周龄Sprague-Dawley(SD)大鼠，体重200g-240g，先饲养1周适应实验室环境，或待其质量达标后再进行实验，其特征在于，包括以下步骤：

(1)饲养期间自由进食进水，采用周期为12小时的光照/黑暗交替，温、湿度适宜，将78只符合标准的SD大鼠从1号到78号进行标记，雌雄各半，每只大鼠对应固定的序号。然后采用随机数字表法将其均分为A(n＝18)、B(n＝18)、C(n＝18)、D(n＝18)和E(n＝6)5个大组，其中前4个组根据不同的观察时间又分为3个小组，每个小组6只大鼠。

(2)A组：L-Arg干预短期组，第1天腹腔注射L-Arg 5.2g/kg(20％L-Arg,2.6ml/100g)，第2-5天腹腔注射量减半，即L-Arg 2.6g/kg(20％L-Arg,1.3ml/100g)。

(3)B组：L-Arg干预长期组，第1天腹腔注射L-Arg 5.2g/kg(20％L-Arg,2.6ml/100g)，第2-10天腹腔注射量减半，即L-Arg 2.6g/kg(20％L-Arg,1.3ml/100g)。

(4)C组：生理盐水干预短期组，在各时间段给予与A组L-Arg相同体积的生理盐水，干预周期为5天。

(5)D组：生理盐水干预长期组，在各时间段给予与B组L-Arg相同体积的生理盐水，干预周期为10天。

(6)E组：正常对照组，不予任何干预，所有实验大鼠均采用自由进食水。

(7)标本采样：前4个组分别在干预结束后的第1天、第7天及第14天禁食24h后采集标本，E组则在干预结束后第14天采集标本。

(8)进行大鼠体重的变化、小肠推进率、胃肠激素、RAS系统成分、一氧化氮(NO)及环磷酸鸟苷(cGMP)的检测。

2.根据权利要求1所述的一种胃肠动力障碍动物模型的制备方法，其特征在于：所述20％L-Arg盐溶液采用适量左旋精氨酸(L-Arg)粉末溶于生理盐水，配成20％(w/v)左旋精氨酸盐溶液(20g L-Arg溶于100ml生理盐水中)，搅拌混勻后加入适量0.1mol/L HCI或0.1mol/L NaOH直至溶液变澄清，调节PH 7.35-7.45左右，常温保存。

3.根据权利要求1所述的一种胃肠动力障碍动物模型的制备方法，其特征在于：所述2％BD-2000溶液采用2g葡聚糖蓝-2000溶于100ml的去离子水中，搅拌均匀，常温保存。

4.根据权利要求1所述的一种胃肠动力障碍动物模型的制备方法，其特征在于：所述0.5％戊巴比妥钠溶液采用0.1g戊巴比妥钠粉末溶于20ml生理盐水中，避光常温保存。

5.根据权利要求1所述的一种胃肠动力障碍动物模型的制备方法，其特征在于：所述4％多聚甲醛溶液采用40g多聚甲醛粉末溶于900ml蒸馏水中，逐渐调整PH至7.35-7.45，最后调整液体总量为1000ml，常温保存。

6.根据权利要求1所述的一种胃肠动力障碍动物模型的制备方法，其特征在于：所述标本采集主要包括血样采集、胃组织采集和肠组织采集。

7.根据权利要求1所述的一种胃肠动力障碍动物模型的制备方法，其特征在于：所述大鼠体重的变化采用电子称每天称量并记录大鼠体重的变化，所述小肠推进率根据量取幽门至BD-2000最前端的距离及小肠全长进行计算。

8.根据权利要求1所述的一种胃肠动力障碍动物模型的制备方法，其特征在于：所述胃肠激素检测主要包括胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)、血管活性肠肽(VIP)及生长抑素(SST)等。采用ELISA试剂盒法检测大鼠血浆中各类胃肠激素的表达水平。

9.根据权利要求1所述的一种胃肠动力障碍动物模型的制备方法，其特征在于：所述RAS系统成分检测主要包括血浆肾素、血管紧张素II(AngII)、血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素转换酶2(ACE2)及组织中血管紧张素II受体(AT2R)，胃肠组织中AT2R的检测采用免疫组织化学法。

10.根据权利要求1所述的一种胃肠动力障碍动物模型的制备方法，其特征在于：所述一氧化氮(NO)检测在组织中NO的含量采用格里斯试剂系统(Griess Reagent System)进行检测。