[发明专利]用于体外扩增造血干细胞的培养体系

说明书

本发明提供用于造血干细胞扩增的培养体系，其包含基础培养基和促进造血干细胞扩增的组合物，所述组合物包含与造血调控有关的早期造血生长因子。本发明还提供采用该培养体系体外扩增造血干细胞的方法以及包含上述促进造血干细胞扩增的组合物的试剂盒。采用本发明的上述培养体系对造血干细胞进行体外扩增，可实现造血干细胞的扩增倍数达到数百倍以上，从而可有效解决血液系统疾病的治疗过程中造血干细胞数量不足的问题。

技术领域

本发明涉及干细胞培养领域，具体而言，本发明涉及用于体外扩增造血干细胞的培养体系以及采用该培养体系扩增造血干细胞的方法。

背景技术

造血干细胞具有自我更新、高度繁殖以及向多个方向分化的能力，因此，其在治疗白血病、再生障碍性贫血等你血液系统疾病方面有着广泛的应用。目前，主要采用造血干细胞移植来治疗血液系统疾病，用于移植的造血干细胞主要有三种来源：骨髓、外周血和脐带血。骨髓和外周血是目前广泛应用的造血干细胞来源，但是存在配型困难等问题。而采用脐带血来源的造血干细胞进行移植可在一定程度上避免这些问题，但是脐带血来源的造血干细胞的数量有限，难以满足造血干细胞移植所需的数量，因此，体外扩增造血干细胞是解决治疗血液系统疾病中的造血干细胞数量不足的问题的关键途径。

发明内容

一方面，本发明提供用于造血干细胞扩增的培养体系，其包含基础培养基和促进造血干细胞扩增的组合物，所述组合物包含与造血调控有关的早期造血生长因子，所述与造血调控有关的早期造血生长因子选自：干细胞生长因子，Fms样酪氨酸激酶受体3的配体和血小板生成素。

在一些实施方式中，所述干细胞生长因子的浓度为10-100ng/ml，所述Fms样酪氨酸激酶受体3的配体的浓度为10-100ng/ml，和/或所述血小板生成素的浓度为10-100ng/ml。

在另一些实施方式中，所述干细胞生长因子的浓度为10-50ng/ml，所述Fms样酪氨酸激酶受体3的配体的浓度为10-50ng/ml，和/或所述血小板生成素的浓度为10-50ng/ml。

本发明的用于造血干细胞扩增的培养体系中所包含的促进造血干细胞扩增的组合物还包含芳烃受体拮抗剂，和/或人造血干细胞自身更新的激动剂，和/或GSK-3抑制剂。其中，所述芳烃受体拮抗剂选自：Stem Regenin 1；所述人造血干细胞自身更新的激动剂选自：UM171；和/或所述GSK抑制剂选自：CHIR-99021。

在一些实施方式中，Stem Regenin 1的浓度为0.5-1μM，UM171的浓度为20-100nM，和/或CHIR-99021的浓度为100-500nM。

在另一些实施方式中，Stem Regenin 1的浓度为：0.75-1μM，UM171的浓度为：50-100nM，和/或CHIR-99021的浓度为：250-500nM。

本发明的用于造血干细胞扩增的培养体系中所包含的促进造血干细胞扩增的组合物进一步包含IL-3，和/或IL-6，和/或粒细胞集落刺激因子，和/或多效生长因子，和/或组蛋白乙酰化酶抑制剂，和/或地西他宾。

在一些实施方式中，IL-3的浓度为：2ng/ml；IL-6的浓度为：10ng/ml；所述粒细胞集落刺激因子的浓度为：1ng/ml；所述多效生长因子的浓度为：100ng/ml；所述组蛋白乙酰化酶抑制剂的浓度为：50μM；和/或所述地西他宾的浓度为：60nM。

本发明的用于造血干细胞扩增的培养体系中的基础培养基是StemSpan无血清扩增培养基，并且所述基础培养基补充有50IU/mL青霉素、50μg/mL链霉素和10μg/ml肝素。

在本发明的一种实施方式中，所述培养体系包含：

补充有50IU/mL青霉素、50μg/mL链霉素和10μg/ml肝素的StemSpan无血清扩增培养基作为基础培养基，以及，