[发明专利]一种功能化聚乙烯亚胺纳米颗粒/Bcl‑2siRNA的制备方法

权利要求书

1.一种功能化聚乙烯亚胺纳米颗粒/Bcl-2siRNA的制备方法，包括：

(1)将NH₂-PEG-COOH溶液与6-MAL溶液混合，搅拌反应8h，得到MAL-PEG-COOH溶液，然后加入RGD-SH溶液，搅拌反应12h，得到RGD-PEG-COOH溶液；

(2)将步骤(1)中的RGD-PEG-COOH溶液经过EDC·HCl和NHS活化后，加入聚乙烯亚胺PEI溶液，反应24h，得到PEI-(PEG-RGD)₁₀溶液，然后加入经EDC·HCl和NHS活化的mPEG-COOH溶液，反应24h，得到PEI-(PEG-RGD)₁₀-mPEG₁₀溶液；

(3)将HAuCl₄·4H₂O水溶液加入到步骤(2)中的PEI-(PEG-RGD)₁₀-mPEG₁₀溶液中，搅拌反应30min，然后加入NaBH₄溶液，搅拌3h，透析，冷冻干燥，得到{(Au⁰)₂₅-PEI-(PEG-RGD)₁₀-mPEG₁₀}；

(4)将步骤(3)中的{(Au⁰)₂₅-PEI-(PEG-RGD)₁₀-mPEG₁₀}用无菌水稀释，然后用DEPC水溶液稀释Bcl-2siRNA，再将二者混合均匀后于37℃孵育30min，得到功能化聚乙烯亚胺纳米颗粒/Bcl-2siRNA。

2.根据权利要求1所述的一种功能化聚乙烯亚胺纳米颗粒/Bcl-2siRNA的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中NH₂-PEG-COOH、6-MAL和RGD-SH的摩尔比为1：1：1。

3.根据权利要求1所述的一种功能化聚乙烯亚胺纳米颗粒/Bcl-2siRNA的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中NH₂-PEG-COOH溶液、6-MAL溶液和RGD-SH溶液的浓度均为5.8mmol/mL，溶剂均为DMSO。

4.根据权利要求1所述的一种功能化聚乙烯亚胺纳米颗粒/Bcl-2siRNA的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中EDC·HCl、NHS和mPEG-COOH的摩尔比为1.8：1.8：1；EDC·HCl、NHS和RGD-PEG-COOH的摩尔比为1.8：1.8：1。

5.根据权利要求1所述的一种功能化聚乙烯亚胺纳米颗粒/Bcl-2siRNA的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中mPEG-COOH与PEI的摩尔比为10：1。

6.根据权利要求1所述的一种功能化聚乙烯亚胺纳米颗粒/Bcl-2siRNA的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中mPEG-COOH溶液的浓度为5.8mmol/mL；聚乙烯亚胺纳米颗粒溶液的浓度为0.58mmol/mL；溶剂均为DMSO。

7.根据权利要求1所述的一种功能化聚乙烯亚胺纳米颗粒/Bcl-2siRNA的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中HAuCl₄·4H₂O与PEI的摩尔比为25：1；NaBH₄与HAuCl₄·4H₂O的摩尔比为5：1。

8.根据权利要求1所述的一种功能化聚乙烯亚胺纳米颗粒/Bcl-2siRNA的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中HAuCl₄·4H₂O溶液的浓度为30mg/mL，NaBH₄溶液的浓度为10mg/mL；溶剂均为水。

9.根据权利要求1所述的一种功能化聚乙烯亚胺纳米颗粒/Bcl-2siRNA的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中{(Au⁰)₂₅-PEI-(PEG-RGD)₁₀-mPEG₁₀}与Bcl-2siRNA的N/P比为5：1～15：1。

10.根据权利要求1所述的一种功能化聚乙烯亚胺纳米颗粒/Bcl-2siRNA的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中{(Au⁰)₂₅-PEI-(PEG-RGD)₁₀-mPEG₁₀}作为Bcl-2siRNA的载体应用于诱导特异性癌细胞基因沉默。