[发明专利]罗汉果高效脱毒的组织培养方法

权利要求书

1.一种罗汉果高效脱毒的组织培养方法，其特征在于，包括：

将外植体进行消毒得到无菌外植体；将所得无菌外植体接种至MS诱导培养基中进行诱导培养得到无菌试管苗；将所得无菌试管苗于MS预培养基中进行预培养得到预培养试管苗；将所得的预培养试管苗接种至MS脱毒培养基中进行脱毒培养得到试管丛生芽；选取健壮的试管丛生芽接种至1/2MS生根培养基中进行生根培养得到带根植株，最后将所得的带根植株进行练苗和移栽；

其中，所述MS诱导培养基至少包含0.5-1.0mg/L的金刚烷酮，所述MS预培养基至少包含0.5-1.0mg/L的金刚烷酮和0.1-0.6mg/L的硝酸银。

2.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法，其特征在于，选取带病毒的罗汉果植株新萌发的嫩芽作为外植体，然后将所得的外植体剥去叶后，依次用体积分数为1-3％的洗洁精水溶液浸泡5-6min、自来水冲洗15-20min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升体积分数为0.1-0.2％的升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到所述无菌外植体。

3.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法，其特征在于，在接种至MS诱导培养基之前，先将无菌外植体切成带有一个腋芽的茎段。

4.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法，其特征在于，所述MS诱导培养基包含：0.3mg/L的6-BA、0.1mg/L的IAA、0.5-1.0mg/L的金刚烷酮、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，pH值为5.5-6。

5.如权利要求4所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法，其特征在于，所述诱导培养的培养条件为：温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天，培养时间为30天。

6.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法，其特征在于，所述MS预培养基包含：0.5mg/L的6-BA、0.2mg/L的IBA、0.5-1.0mg/L的金刚烷酮、0.1-0.6mg/L的硝酸银、30g/L蔗糖，pH值为5.5-6，预培养的时间为9-11天。

7.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法，其特征在于，所述脱毒培养步骤中，从所述预培养试管苗剥取0.2-0.3mm的茎尖分生组织，将所得的茎尖分生组织接种所述脱毒培养基中，温度为23-27℃的条件下黑暗培养20天，得到所述试管丛生芽。

8.如权利要求7所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法，其特征在于，所述脱毒培养基包含：0.2-1.0mg/L的TDZ、0.1-0.5mg/L的ZT、0.1-1.0mg/L的IBA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，pH值为5.5-6。

9.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法，其特征在于，所述生根培养基包含：0.2-1.0mg/L的NAA、1.5g/L的AC、10/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

所述生根培养的条件为：温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天，培养时间为20天。

10.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法，其特征在于，所述练苗和移栽具体包括：将所得的带根植株使用自来水培养一周，待表面角质形成后，将幼苗取出，洗净根部，再使用完全培养液培养一个月后移栽到大田即得到罗汉果幼株。