[发明专利]一种检测嘧霉胺残留的ELISA检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种嘧霉胺多克隆抗体的制备方法，其特征在于：将乙腈、2-氯-4,6-二甲基嘧啶、吡啶加至三口烧瓶中，将烧杯置于磁力搅拌器上，并于反应器内放置温度计，在50~60 ℃下滴加对氨基苯乙酸，反应后，TLC跟踪直至原料消失，然后降温至30 ℃，将反应产物过层析柱子，收集半抗原产物；将半抗原与载体蛋白进行偶联，得到嘧霉胺人工抗原；利用嘧霉胺人工抗原对小型哺乳动物进行免疫，所得到的多克隆抗体即为嘧霉胺多克隆抗体。

2.一种检测嘧霉胺残留的酶联免疫吸附ELISA检测试剂盒，其特征在于:包括包被有嘧霉胺包被抗原的酶标板、嘧霉胺标准品、嘧霉胺抗体、洗涤液、酶标物、底物显色液、反应终止液。

3.根据权利要求2所述的检测嘧霉胺残留的酶联免疫吸附ELISA检测试剂盒，其特征在于：酶标物为辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体。

4.根据权利要求2所述的检测嘧霉胺残留的酶联免疫吸附ELISA检测试剂盒，其特征在于：洗涤液为Na₂HPO₄·12H2O 68.8 g，NaH₂PO₄ 6.9 g，NaCl 45 g；

底物显色液为TMB-过氧化氢脲溶液，配制步骤如下：底物液A：取无水乙酸钠8.2 g，β-糊精2.5 g，过氧化氢脲428.6 mg，加双蒸水至1000 mL，调节PH至5.0；底物液B：取100 mg TMB溶于10 mL DMSO中；反应终止液为1.25 mol/L的H₂SO₄。

5.一种利用如权利要求2或3或4所述试剂盒检测果蔬中嘧霉胺残留的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）称取果蔬中可食用部分；加入10 mL提取液，充分研磨过滤，收集的滤液即为待测样品；

（2）在包被有抗原并封闭好的酶检测嘧霉胺残留的酶联免疫吸附检测试剂盒标板孔中，加入相同体积的嘧霉胺抗体及待测样品，37 ℃孵育40 min后用洗涤液洗涤3次；

（3）加入辣根过氧化物酶标记羊抗兔抗体0.1 mL，37 ℃孵育40min后用洗涤液洗涤3次；

（4）加入新鲜配制的底酶标板物显色液0.1 mL，37 ℃孵育20min；

（5）加入终止液0.05 mL终止反应；

（6）将酶标板置于酶标仪中，于490 nm波长处测定检测结果。