[发明专利]鉴定鸭肝炎病毒的引物组合及其应用

说明书

本发明公开了一种鉴定鸭肝炎病毒的引物组合及其应用。本发明提供的引物组合由序列1至序列6所示的6种DNA分子组成。所述引物组合可应用于鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为鸭肝炎病毒，还可应用于检测待测样本是否感染了鸭肝炎病毒。本发明成功建立了鸭肝炎病毒的RT‑LAMP检测方法。本发明所建立的检测方法准确性高、灵敏度高、特异性强，具有极大的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物检测技术应用领域，具体涉及一种鉴定鸭肝炎病毒的引物组合及其应用。

背景技术

鸭肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus，DHV)是小RNA病毒科、肠道病毒属的一种。可感染2周龄以下的小鸭，死亡率高达90％以上，是危害养鸭业最为严重的传染病之一。成年鸭、鸡、鹅都不感染。

传统的病原鉴定方法包括中和试验和血清保护试验，这两种方法实用性强、特异性高，但所需时间较长，是目前用于诊断或血清流行病学调查的常规方法。其他血清学诊断方法还包括酶联免疫吸附试验(ELISA)和斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)，胶体金免疫电镜技术检测DHV，但这些检测存在耗时长、敏感性较低、不易标准化等缺点，结果可靠性并不是很高，且价格较为昂贵。目前已建立的DHV RT-PCR和荧光定量RT-PCR检测方法，虽然敏感性较高，但是需要使用昂贵的仪器和试剂等。

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)通过识别靶序列上6个特异区域的引物，在一种具有链置换特性的DNA聚合酶——Bst酶(BstDNApolymerase)的作用下，能够在恒温条件下高效、快速、特异地扩增DNA靶序列。在反应体系中加入逆转录酶，即可检测RNA靶序列。在LAMP体系中加入荧光染料，可根据反应体系中的荧光信号强度来判断反应的进行情况。目前，LAMP技术已经被广泛应用于病原微生物的检测中，包括人类致病微生物、动植物病毒以及寄生虫所致疾病的诊断。对LAMP技术而言，引物设计是其核心。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴定鸭肝炎病毒的引物组合及其应用。

本发明提供了一种引物组合，由引物F3-1、引物B3-1、引物FIP-1、引物BIP-1、引物LF-1和引物LB-1组成；

所述引物F3-1为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物B3-1为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

所述引物FIP-1为如下(a5)或(a6)：

(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；

(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；

所述引物BIP-1为如下(a7)或(a8)：

(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；

(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；

所述引物LF-1为如下(a9)或(a10)：

(a9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；