[发明专利]抗I2杂交瘤细胞株及其产生的单克隆抗体

说明书

本发明公开了一种杂交瘤细胞株，其保藏编号为CCTCC NO：C2016154，以及由此杂交瘤细胞株产生的抗I2单克隆抗体。本发明还涉及基于此杂交瘤株的工程抗体及其在免疫检测工具中的应用，用此工程抗体能够替人源血液作为阳性对照。

技术领域

本发明涉及免疫学技术领域，特别涉及制备一种制备分泌抗I2的单克隆抗体杂交瘤细胞株，以及基于该杂交瘤细胞株制备的I2嵌合抗体在炎症性肠病检测中的应用。

背景技术

炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)是一种慢性非特异性肠道炎性疾病，包括溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)和克罗恩病(Crohn’s disease，CD)，近十多年来发病率亦呈逐步增高趋势。IBD的临床表现复杂多样，不仅有消化道症状，还可有肠外表现。由于症状为腹痛、腹泻、便血等非特异性肠炎表现，CD与UC、以及IBD与结核性肠炎等其他肠道慢性疾病很难鉴别诊断，特别在缺乏组织学证据时，需有更多相对特异性的标志物为诊断提供帮助。研究发现，多种非侵入性的生物活性标志物对IBD的诊断及炎症活动性的评价具有重要意义。

目前鉴别UC与CD的生物标志物主要集中在自身免疫抗体与抗微生物抗体，I2(Pseudomonas-associated sequenceI2)是一种在活动性CD患者病变肠黏膜上发现的蛋白，通过氨基酸序列分析，发现I2是一种肠道正常菌荧光假单胞菌(pseudomonasfluorescens)pfiT基因的一段序列。研究表明，大约有20～30％CD患者血清抗I2的IgA或IgG抗体呈阳性，而在正常人和非CD肠道疾病患者中的抗I2的IgA或IgG抗体极少被检测到。因此，抗I2的IgA和IgG抗体检测是CD诊断的有效指标之一。

应用免疫检测技术，如酶联免疫法、化学发光法、免疫层析法等测定样品中抗体的浓度是常用的检测方法。在此类试验中，必须设立阳性对照孔，阳性对照多用临床病人的血清或其他形式的人血清。但人源性血制品，很可能含有致病性传染物质，对操作者存在潜在的威胁，同时在配制阳性对照过程中需要大量血清或血浆，而有些病的血清或血浆又比较难得到。因此应用人源血液作为阳性对照，对于制备大量检测试剂盒产品而言，原料受到客观的限制。所以需寻求一种阳性对照替代品应用于I2的IgA或IgG抗体检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种抗I2单克隆抗体杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体。

本发明的另一个目的是：提供一种基于I2单克隆抗体杂交瘤细胞株的工程抗体及其在医学检验领域的用途。

本发明所述杂交瘤细胞株，保藏于中国典型培养物保藏中心(简称为CCTCC)，保藏日期为2016年8月12日，保藏编号为CCTCC NO：C2016154。

本发明提供了如下的技术方案：研制I2单克隆抗体杂交瘤，基于此杂交瘤细胞株制备人源化嵌合抗体，即将I2的单克隆抗体的轻、重链可变区基因插入到含有人源IgA或IgG抗体恒定区基因的表达载体中，转入动物细胞中表达得到的I2的人源化IgA Fc或人源化IgG Fc的嵌合抗体，这两种I2人源化IgA Fc或人源化IgG Fc嵌合抗体可分别作为检测抗I2的IgA或IgG抗体的阳性对照物。

本发明方案包括如下步骤：

(1)菌荧光假单胞菌pfiT基因表达物经分离纯化得到I2抗原；

(2)I2抗原多次免疫BALB/c小鼠，ELISA法检测免疫小鼠血清效价；

(3)免疫的BALB/c小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞进行融合；

(4)有限稀释法获得单克隆，ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞；

(5)杂交瘤的单克隆抗体鉴定：最终获得能分泌抗I2特异性抗体的杂交瘤细胞株，亚型鉴定为IgG1，ELISA测效价为1∶320000。