[发明专利]一种检测PKU和CAH的串联质谱试剂盒

说明书

本发明为利用高通量液相色谱串联质谱法同时检测新生儿滤纸干血片中苯丙氨酸和17α‑羟孕酮的试剂盒，能够同时检测苯丙酮尿症和先天性肾上腺皮质增生症两种新生儿遗传代谢病。提供了较为简便的实验操作方法，包括内标工作液的配制，样本孵育，移液，上机检测四个步骤，简化了实验操作流程，提升检测效率。本发明试剂盒高通量、高准确性、高重复性，且操作简单，能够大大提高工作效率，降低对采血量的要求。

技术领域

本发明涉及苯丙氨酸和17-羟孕酮检测的技术领域，特别涉及一种高通量液相色谱串联质谱法同时检测新生儿滤纸干血片中苯丙氨酸和17-羟孕酮的成品试剂盒。

背景技术

苯丙酮尿症(Phenylketonuria，PKU)是一种由于人体正常染色体缺陷造成新生儿体内苯丙氨酸代谢紊乱性疾病。其发病机理是新生儿体内缺乏苯丙氨酸羟化酶(phenylalaninehydroxylase，PAH)，此酶可以将蛋白质中的苯丙氨酸水解为酪氨酸，便于人体吸收和利用。由于酪氨酸的形成途径被阻断，血液中的苯丙氨酸不能被水解，因此，苯丙氨酸在血、脑脊液、各种组织和尿液中的浓度极度增高，同时产生了大量苯丙酮酸、苯乙酸、苯乳酸和对羟基苯乙酸等旁路代谢产物并自尿中排出，这些代谢产物经汗及尿排出，使汗、尿带鼠尿或马粪气味。

先天性肾上腺皮质增生症(congenital adrenal hyperplasia，CAH)是一组常染色体隐性遗传、内分泌代谢失调病，分别由21-羟化酶、11b羟化酶、3b类固醇脱氢酶、17a羟化酶等缺陷所造成的，其中21-羟化酶缺乏症是CAH中最为多见的一种(90％～95％)，其共同特点是皮质醇合成障碍，引起促肾上腺皮质激素(ACTH)分泌增加导致肾上腺增生，出现脱水、失盐、外生殖器性别不清、生长加速、皮肤黏膜色素沉着、不同程度的男性化等各种不同临床表现。但可通过检测新生儿17-OHP浓度水平筛查出大部分CAH患儿，并经过及时及早的治疗，病情可以得到有效的控制。17-羟孕酮(17-hydoxy progesterone，17-OHP)是一种内源性孕激素，由肾上腺皮质及性腺产生，是最常用的筛查CAH的敏感指标。苯丙酮尿症、CAH和呆小症已经成为新生儿必筛项目。

苯丙氨酸和17-羟孕酮均属于小分子代谢物，目前检测新生儿采血滤纸片上的苯丙氨酸市售试剂盒主要以荧光分析法为主，该法利用苯丙氨酸与茚三酮和二肽反应生成荧光物质进行定量检测，主要存在灵敏度低、特异性差、荧光物质半衰期短、容易被污染、假阳性高等问题；检测新生儿采血滤纸片上的17-羟孕酮市售试剂盒主要以时间分辨免疫荧光法为主，该法利用抗原抗体“竞争法”检测17-羟孕酮的含量，存在免疫“竞争法”不可避免的问题：特异性低，不同抗原或者抗体的对检测结果影响很大，不同厂家的试剂测值差异大，准确性低等。而且，目前所有市售试剂盒一次实验只能检测单一指标，不能实现一次实验同时检测苯丙氨酸和17-羟孕酮两个标志物，不仅工作效率低，也加大了采血量的要求。

因此，本技术领域迫切需要解决这样一个问题：如何能够提供一种简单方便的、高通量的、准确性高的、重复性好的，用于同时检测新生儿采血滤纸片上的苯丙氨酸和17-羟孕酮的试剂盒。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种适用于同时检测新生儿采血滤纸片上的苯丙氨酸和17-羟孕酮的高通量、高准确性、高重复性试剂盒，操作简单，能够大大提高工作效率，降低对采血量的要求。

为了解决上述问题，本发明公开了一种高通量液相色谱串联质谱法同时检测新生儿采血滤纸片上的苯丙氨酸和17-羟孕酮的成品试剂盒，包括：

一、试剂盒组成成分及配制