[实用新型]一种Leber遗传性视神经病变基因检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于生物技术领域，涉及一种基因多态性检测试剂盒，具体涉及一种Leber遗传性视神经病变基因检测试剂盒。

背景技术

Leber遗传性视神经病变(LHON)是一种由线粒体DNA突变引起的母系遗传的线粒体疾病，主要累及视盘黄斑束纤维，导致视神经退行性变，青春期发病，双眼急性或亚急性中心视力下降。因为视力损害严重，不仅给患者心理上造成极大的痛苦和障碍，也给家庭和社会带来沉重的负担。

随着分子生物学的快速发展，目前已发现近40种不同的mtDNA点突变与LHON密切相关，但只有G3460A、G11778A、T14484C三个位点的突变被称为LHON的“原发性点突变”，超过95％的LHON家系为此三个原发突变。因此，研发一种快速简单有效的检测G3460A、G11778A、T14484C三个突变位点基因型的试剂盒显得尤为重要(MackeyDA,OostraRJ,RosenbergT,PrimarypathogenicmtDNAmutationsinmultigenerationpedigreeswithLeberhereditaryopticneuropathy[J].AmJHumGenet,1996；59:481-5.)。

实用新型内容

本实用新型要解决的技术问题为目前市场上针对Leber遗传性视神经病变基因检测特异性不强，成本高且操作复杂的问题，本实用新型能较好的应用于Leber遗传性视神经病变基因G3460A、G11778A、T14484C三个位点单核苷酸多态性检测，体积小，操作简单，便于运输携带和使用。

为实现上述目的，本实用新型采用以下技术方案：

一种Leber遗传性视神经病变基因检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括盒体(1)、海绵衬垫(2)，所述的海绵衬垫(2)置于盒体(1)内，海绵衬垫(2)上设有多个容器孔并装有多个装有检测试剂的试剂管，分别为装有G3460A位点基因多态性检测反应液的试剂管(3)、装有G11778A位点基因多态性检测反应液的试剂管(4)、装有T14484C位点基因多态性检测反应液的试剂管(5)、装有野生型阳性对照的试剂管(6)、装有突变型阳性对照的试剂管(7)、装有杂合子阳性对照的试剂管(8)、装有阴性对照的试剂管(9)。

所述的容器孔较佳的为7个，容器孔在所述的海绵衬垫上分2排排列，上述的装有G3460A、G11778A、T14484C三个位点基因多态性检测反应液的试剂管3、4、5均为2ml试剂管，装有野生型阳性对照、突变型阳性对照、杂合子阳性对照、阴性对照的试剂管均为0.5ml试剂管。

上述的装有G3460A位点基因多态性检测反应液的试剂管(3)、装有G11778A位点基因多态性检测反应液的试剂管(4)、装有T14484C位点基因多态性检测反应液的试剂管(5)均包括DNA聚合酶、尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)、特异性引物和探针及Mg2+。

所述的阳性对照包括野生型阳性对照、突变型阳性对照、杂合子阳性对照，所述的野生型阳性对照为分别含有G3460A、G11778A、T14484C三个位点的野生型纯合子基因序列及其多态性检测上游和下游引物及引物之间的线粒体DNA序列的质粒，突变型阳性对照为分别含有G3460A、G11778A、T14484C三个位点的突变型纯合子基因及其多态性检测上游和下游引物及引物之间的线粒体DNA序列的质粒，杂合子阳性对照为等比例混合的野生型阳性对照质粒和突变型阳性对照质粒。

所述的G3460A位点基因多态性检测引物包括：

上游引物，其序列为：5'-GCTTACCGAACGAAAAATTCTAGG-3'。

下游引物，其序列为：5'-GGTGATGTAGAGGGTGATGGTAGAT-3'。

所述的G11778A位点基因多态性检测引物包括：

上游引物，其序列为：5'-CGCAGTCATTCTCATAATCGCC-3'。

下游引物，其序列为：5'-GGGGGGTAAGGCGAGGTT-3'。

所述的T14484C位点基因多态性检测引物包括：

上游引物，其序列为：5'-CAGCGATGGCTATTGAGGAGTA-3'。

下游引物，其序列为：5'-CGAATCAACCCTGACCCCTCT-3'。

所述的G3460A位点基因多态性检测探针包括：