[实用新型]一种用于检测或治疗人子宫内膜癌的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤免疫学领域。本发明涉及一种新型子宫内膜癌肿瘤标志物GAB31，以及抗GAB31的单克隆抗体EM2D9。细胞和组织学水平证明：EM2D9特异性识别人子宫内膜癌细胞及人子宫内膜癌组织。本发明还涉及一个免疫磁珠法检测人子宫内膜癌的方法。该检测方法所检测的抗原为本发明中的人的子宫内膜癌新型标记物GAB31，检测抗体为本发明中抗人子宫内膜癌GAB31的单克隆抗体EM2D9。

背景技术

子宫内膜癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，其发病率高居欧美国家女性生殖系统恶性肿瘤首位。相对于欧美国家，发展中国家子宫内膜癌发病率较低，但死亡率较高。随着我国百姓的生活及饮食习惯趋于西化，尤其是经济发达地区，子宫内膜癌的发病率正逐年增高，目前居我国女性生殖系统恶性肿瘤的第二位，仅次于宫颈癌，且发病年龄渐趋年轻化。子宫内膜癌的病因至今尚不明确。虽然子宫内膜癌的早期诊断方法有经阴道超声、子宫内膜活检、诊断性刮宫、子宫内膜细胞学等诸多方法，但对于在无症状的普通人群和危险人群中筛查子宫内膜癌的方法，业内当前尚没有形成统一的指南或建议。因而，探索子宫内膜癌筛查的策略是当今医学界子宫内膜癌研究的热点领域。目前子宫内膜癌的常用诊断方法用于筛查策略，都或多或少有着比较大的缺陷。经阴道超声无法确定子宫内膜病变时内膜厚度的界值；接受子宫内膜活检者或多或少有着不适感，而且有相当比例的受检者因为组织取材量不足导致漏诊；诊断性刮宫是有创性操作，纳入筛查策略显然不合适，且受制于医疗水平的原因，非发达地区无法普及；宫腔镜检查费用高昂，且单独运用诊断价值有限；子宫内膜细胞学的特点最接近筛查策略，但是，当前缺乏统一的细胞学标准。可见，子宫内膜癌的筛查策略仍需要进一步的探究。

近年来，肿瘤标志物由于其较高的特异性和灵敏度的特点，对肿瘤的筛查、诊断、分类、预后监测以及治疗提供相当大的指导意义。有研究表明CD44参与子宫内膜癌细胞的侵袭和转移。CD44属于细胞多功能粘附分子,是单基因编码的一种跨膜糖蛋白,其广泛存在于多种细胞和组织。CD44有10个变异外显子，因而其可以通过选择性剪切、拼接形成多种异构体,结合细胞表面相应配体,进而能够调节细胞的多种生理、病理过程。研究表明，CD44分子在多种肿瘤中高表达,并与肿瘤细胞的生长、侵袭、转移能力以及肿瘤环境中的造血干细胞的归巢密切相关,并可作为肿瘤干细胞的标志物,或可作为肿瘤筛查、预后判断及治疗的靶点。CD44的生物学功能及表达调控模式因不同条件而异，比如肿瘤种类、生长条件。多种因素可影响其表达,如雌激素受体、转录因子等。CD44的异常糖基化修饰可导致肿瘤细胞恶性程度的改变，探究子宫内膜癌中CD44的异常修饰，可为子宫内膜癌的筛查、诊断、预后判断及治疗提供一种新的靶点，对于子宫内膜癌的诊断和治疗将具有极其重要的意义。

实用新型内容

本发明从新鲜的人子宫内膜癌组织中提取总蛋白免疫小鼠，制备杂交瘤细胞株。用ELISA的方法筛选到一株能与人子宫内膜癌组织高度特异结合的抗体EM2D9，该抗体属于IgG1亚类。免疫组织化学证实，EM2D9抗体与人子宫内膜癌组织呈强阳性反应，而与人正常子宫内膜组织无交叉反应。

本发明通过免疫沉淀结合质谱与糖芯片结果鉴定，EM2D9抗体识别的抗原是一种异常糖基化的CD44，其定位于细胞膜上，其表位为：Galb1‐3(Neu5Aca2‐6)GlcNAcb1‐4Galb1‐4Glcb属于全新的子宫内膜癌标志物。

本发明将EM2D9抗体偶联纳米磁颗粒，制备成抗子宫内膜癌免疫磁珠(EM2D9‐MB)，捕获并富集脱落的子宫内膜癌细胞，经瑞氏吉姆萨病理涂片染色，在显微镜下进行镜检诊断。该试剂盒适用于肿瘤病人的早期筛查、预后监测及病理辅助诊断。

本发明的创新性在于：(1)筛选并制备了一种抗人子宫内膜癌的单克隆抗体EM2D9，该抗体与人子宫内膜癌组织呈强阳性反应，而与人正常子宫内膜组织无交叉反应；(2)揭示了EM2D9抗体识别的抗原表位为Galb1‐3(Neu5Aca2‐6)GlcNAcb1‐4Galb1‐4Glcb，为全新的子宫内膜癌标志物；(3)开发了一种基于EM2D9抗体的高灵敏度的用于检测人子宫内膜癌的免疫磁珠方法。

新型详述