[实用新型]一种细胞囊泡快速标记装置

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种实验室用装置，具体而言，是一种细胞囊泡快速标记装置及方法，该装置简单，方法高效，可进行实时观察记录和实验。

背景技术

细胞囊泡形态和动态变化的研究首先需要对囊泡进行荧光标记。目前，常用的标记办法是，用一定浓度的荧光染料进行细胞外孵育，待标记上后将胞外的染料进行洗脱，然后到显微镜下进行动态观察并记录，从标记、到洗脱、再到转移到显微镜下观察记录，这个过程通常需要10-30分钟的时间。然而，很多类型的囊泡动态变化过程非常短暂，在洗脱和转移的过程中就已经发生了巨大的变化，而这个时间的变化过程是无法被观察和记录的。因此，本实用新型在现有标记方法的基础上进行了改造，利用一种气压作用于微型电极释放微量标记染料的装置，并利用染料在液体中快速扩散的现象，节省了洗脱和转移的时间，获得了一种能快速有效标记、并能实时观察记录的囊泡标记方法。

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种新型的快速有效标记、并能实时观察记录的细胞囊泡标记装置及方法。

本实用新型的细胞囊泡快速标记装置，包括荧光显微镜、显微镜专用活细胞培养系统、玻璃微电极、压力控制器、电刺激器和气瓶，气瓶(压缩空气或氮气)与压力控制器连接，压力控制器输出端通过气管连接玻璃微电极尾端，电刺激器与压力控制器相连用于控制压力控制器的气压输出频率和时长，玻璃微电极内灌有囊泡标记染料，用于对置于显微镜专用活细胞培养系统上的细胞囊泡进行标记，荧光显微镜进行实时观测。

作为优选，所述的玻璃微电极尖端可以为2μm，外径1mm，内径0.5mm。

采用本实用新型装置进行细胞囊泡快速标记的方法，包括如下步骤：

在玻璃微电极内灌入细胞囊泡相应的囊泡标记染料，消除气泡，染料灌入量为玻璃微电极2/3长度；

将气瓶(压缩空气或氮气)连接到压力控制器上，调节输出气压(通常调至3psi)，将玻璃微电极尾端通过气管与压力控制器输出端连接；

连接电刺激器和压力控制器，通过设置电刺激器的参数来控制压力控制器的气压输出频率和时长；

在显微镜专用活细胞培养系统上对细胞囊泡进行标记，荧光显微镜进行实时标记观测。

采用本实用新型的方法完成标记后，停止给气，染料浓度会因扩散作用迅速降低，无需洗脱可以直接进行囊泡动态变化的后续观察。

本实用新型有如下特点：1)标记精度高，可针对指定的细胞进行标记；2)标记过程可以精确控制；3)标记后无需洗脱即可进行观察和记录；4)整个过程在显微镜下实施，标记过程可实时记录；5)可以实现同步药物刺激。因此，本实用新型的装置及方法可快速有效标记、并能实时观察记录。

附图说明

图1囊泡标记装置示意图。

图2玻璃微电极显微图，尖端直径约为2μm，图解比例尺：5μm。

图3通过微电极释放的染料Sulforhodamine 101(SR 101)扩散特性。图3(a)荧光强度检测示意图，不同颜色的同心圆分别代表距离电极尖端不同距离的位置(同心圆半径分别为15μm，50μm，100μm，150μm，200μm，250μm)，图解比例尺，50μm。图3(b)SR 101荧光强度定量分析，所有数据以15μm处的荧光强度值为基准做归一化处理。图3(c)电极尖端300μm范围内荧光染料SR 101在不同时间的扩散分布图，X和Y坐标轴示意以电极尖端为原点的位置。SR 101在5min左右即达到稳定分布状态，并在30min内保持该稳定状态。

图4小胶质细胞迁移过程中的囊泡可以用胞饮泡的标记物Dextran染色，图中分别用Alexa Fluor 488dextran(3000MW,1μg/μl；绿色，AF3K)和Texas Red dextran(70,000MW，1μg/μl；红色，TR70K)对胞饮泡进行了标记，图解比例尺：10μm。

图5胞饮泡在小胶质细胞迁移过程中的动态变化。图5(a)-(c)胞饮泡不同类型的动态变化。图5(a)箭头指示从胞饮泡中分裂出来的小囊泡，图5(b)和图5(c)中的红色和绿色箭头指示先后形成的两个胞饮泡之间的相互作用，图5(c)中的白色和黄色箭头指示囊泡形成后成熟变小的过程，图解比例尺：10μm。图5(d)胞饮泡进入小胶质细胞后的面积动态变化统计结果。

具体实施方式

以下结合实施例对本实用新型所涉及的方法作进一步说明。