[发明专利]来自植物的用于经典猪瘟的疫苗组合物及其制造方法

说明书

本发明涉及用于转化植物的重组载体、用该重组载体转化的植物、在植物中表达的植物制造的经典猪瘟病毒抗原pmE2蛋白及其用途。通过使用包含编码根据本发明的CSFV的GP55蛋白的多核苷酸和编码纤维素结合结构域蛋白的多核苷酸的重组载体；以及使用用该重组载体转化的植物，植物制备的经典猪瘟病毒抗原pmE2蛋白可以以高效率生产，并且比通过其它生产方法获得的具有更高的安全性和稳定性。另外，由于源自植物的经典猪瘟病毒抗原蛋白pmE2包含纤维素结合结构域(CBD)蛋白，因此其可有效地用作确定病毒暴露途径和抗体产生途径的有效标志物。

技术领域

本发明涉及用于转化植物的重组载体，用该重组载体转化的植物，在该植物中表达的植物制造的经典猪瘟病毒抗原植物-制造E2(pmE2)蛋白及其用途。

背景技术

经典猪瘟(Classical swine fever)是一种传染病，其是由病原体即经典猪瘟病毒(CSFV)引起的疾病，并且不在人类也不在其他动物中发生，但一旦在猪中发生，大多数感染猪没有被治愈并且死亡(Penrith,M.-L.,Vosloo,W.and Mather,C.(2011),ClassicalSwine Fever(Hog Cholera):Review of Aspects Relevant to Control.Transboundaryand Emerging Diseases,58:187-196)。由世界动物卫生组织(OIE)列为A类流行病并且在韩国根据“家畜传染病预防法”被归类为一类传染病的经典猪瘟对猪非常有传染性，从而导致高死亡率，伴有高烧和出血，并发展成急性、亚急性或慢性病症。如上所述，由于经典猪瘟是具有高死亡率和发病率的传染病，因此其预防被认为是至关重要的问题，以至于如果不消除经典猪瘟则不能保证猪工业的未来。关于经典猪瘟，猪是唯一的天然宿主，而经典猪瘟的传播主要是由能够感染所有年龄的对病毒敏感的猪的病毒引起的。在韩国，为了疾病防治，已经用经修饰的活病毒LOM菌株制备的活疫苗进行了疫苗接种。由于用于经典猪瘟的活疫苗不能与野生型病毒进行血清学区分，因此重组疫苗(如标记疫苗)正在全球研发以分化由野生型病毒感染和疫苗接种产生的抗体。韩国还致力于开发用于实际使用的疫苗，以简单且精确地鉴定由野外感染产生的抗体和在疫苗使用方面由疫苗接种产生的抗体。

同时，分子生物学和基因工程技术的显著发展也应用于植物领域，因此一直在努力以从植物生产有用的生物活性物质。植物中有用物质的生产提供了以下各种益处：1)生产成本的极大降低；2)完全消除会在本领域的普通方法(用于在动物细胞或微生物中的合成后分离和纯化蛋白)中产生的各种污染物(病毒、致癌基因、肠毒素等)；3)与动物细胞或微生物不同，即使在商业化阶段，也能通过种子进行种子储备管理；和4)根据增加的需求在最短时间内供应相应的物质，因为在对相应物质的需求快速增加时，本发明的植物系统在大量生产所需要的工程技术或成本方面绝对优于常规动物细胞系统技术。

如上所述从经转化的植物产生有用物质的方法受到关注的原因是植物的蛋白合成途径。翻译后修饰是哺乳动物中蛋白合成的关键过程，并且由于植物具有真核生物的蛋白合成途径，因此其可以产生与哺乳动物中表达的蛋白非常相似的蛋白。然而，尽管具有上述几个益处，但是用于以高效率从植物获得有用的生物活性物质(医学上有用的蛋白、疫苗和工业上有价值的酶等)的技术尚未取得很大的成功。

发明内容

[技术问题]

本发明人已经进行了研究以改进使用植物的蛋白生产的低效率，从而构建包含编码经典猪瘟病毒的GP55蛋白的多核苷酸和编码纤维素结合结构域(CBD)蛋白的多核苷酸的重组载体，并且发现使用用重组载体转化的转化植物可以导致高效率地生产源自植物的经典猪瘟病毒抗原pmE2蛋白，以及比其他生产方法显示出更高的安全性和稳定性。此外，他们还发现，pmE2蛋白可用作用于确定病毒暴露途径和抗体产生途径的标志物，从而完成了本发明。

本发明的目的是提供用于生产源自植物的经典猪瘟病毒抗原pmE2蛋白的重组载体。