[发明专利]稳定凝血酶的方法及其组合物

说明书

技术领域

本发明关于一种在一凝血酶溶液中稳定凝血酶的方法。

背景技术

凝血酶是在血液凝固的过程中具有关键作用的丝氨酸蛋白酶。在凝血机制中，凝血酶原会裂解而形成凝血酶，最终造成血液流失的减少。凝血酶接着扮演丝氨酸蛋白酶的角色，将可溶性纤维蛋白原转化为不溶性纤维蛋白，进而促进血液凝结。

然而，凝血酶本质上是不稳定的，甚至在新鲜制得后仅仅2-3小时，其对于血液凝结的活性即显著降低。过去对于如何稳定凝血酶，已有广泛的尝试，但基本上都是化学方式。例如，EP 1221479B1揭示使用一种非离子性界面活性剂和钙离子，而US 8071090B2则揭示使用一种苯甲醇或氯丁醇的防腐剂以及蔗糖。

鉴于过去使用于稳定凝血酶的化学品通常不具生物相容性，因此仍需要一种更安全且更具生物相容性的方法，以制备用于临床用途的凝血酶溶液或组合物。

发明内容

本发明非预期地发现可经由物理的处理，即，一短暂的热处理，来稳定一凝血酶溶液中的凝血酶。

因此，在一方面，本发明提供一种在一凝血酶溶液中稳定凝血酶的方法，其包含在35-85℃的温度下加热该凝血酶溶液1至20秒，然后淬熄加热。

另一方面，本发明提供一种经由本发明的方法而制得的稳定化的凝血酶组合物。

在本发明的部分实施例中，该方法进一步包含淬熄加热的步骤。

根据本发明，可进一步进行冻干而将一稳定化的凝血酶溶液或组合物制成冻干型态。

应理解的是，前述的一般性说明及以下的详细说明皆只是示例性及解释性的，并不限制本发明。

具体实施方式

本发明是基于可经由热处理而稳定凝血酶的非预期性的发现。

在一方面，本发明提供一种在一凝血酶溶液中稳定凝血酶的方法，其包含在35-85℃的温度下加热该凝血酶溶液1至20秒，以及淬熄加热。

可经由本领域中现有的方法而自血液中制得该凝血酶溶液。在一实例中，可通过凝血酶生成装置，从约10mL的血小板稀少的血浆(platelet poor plasma；PPP)中制得6-7mL的凝血酶溶液。

根据一具体实施例，在水浴槽中进行加热。举例而言，将在微量离心管中的1.5mL凝血酶溶液置于35-85℃水浴下1至20秒，然后在冰水中淬熄加热，以获得稳定化的凝血酶溶液。

本领域技术人员可决定适当的加热温度及时间的组合。举例而言，在较短的加热时间下使用较高的加热温度，而在较长的加热时间下使用较低的加热温度。

根据本发明，淬熄步骤是通过将凝血酶溶液的温度返回加热处理前的温度，即，室温或更低的温度，例如，0-25℃的温度，从而停止热处理。可经由将凝血酶溶液浸溶于冰的溶液(例如，冰水)中，以进行淬熄步骤。

一般而言，未经处理的凝血酶溶液会在新鲜制得2小时后丧失其凝血活性。然而，经由本发明方法而稳定的凝血酶溶液可在新鲜制得2小时后仍维持其凝血活性，甚至，当其由冻干型态再溶解后，仍可维持其凝血活性。

另一方面，本发明提供一种稳定化的凝血酶组合物，其是经由在35-85℃的温度下加热一凝血酶溶液1至20秒，然后淬熄加热，而获得该稳定化的凝血酶组合物。

在部分优选的实施例中，进一步冻干该凝血酶溶液而获得一冻干型态的稳定化的凝血酶组合物。

因此，本发明也提供一种经冻干的稳定化的凝血酶组合物，其是经由包含以下步骤的方法而制得：(i)在35-85℃的温度下加热一凝血酶溶液1至20秒，然后淬熄加热，以获得稳定化的凝血酶溶液；以及(ii)将该稳定化的凝血酶溶液冻干。

通过实例以下进一步说明本发明，其是提供用于示例的而非限制的目的。

本领域技术人员应理解在不脱离本发明的广义发明性构思的情况下，可针对上述实施例进行改变。因此，可理解的是，本发明并不局限于其所揭示的特定实施例，其旨在于涵盖由所附申请专利范围所界定的本发明精神及范围内的修饰。