[发明专利]由核苷酸活化的糖产生游离形式的单糖的发酵方法

权利要求书

1.用于使用重组微生物产生游离形式的L-岩藻糖的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供用于合成L-岩藻糖的重组微生物，

所述重组微生物包含能够在不存在受体分子的情况下催化GDP-L-岩藻糖的水解以从GDP-L-岩藻糖释放L-岩藻糖的岩藻糖基转移酶，

所述重组微生物包含编码岩藻糖基转移酶的异源核酸，其中岩藻糖基转移酶为由来自大肠杆菌(Escherichia coli)的如SEQ ID No.3所示的wbgL基因编码的2-岩藻糖基转移酶的变体，与由wbgL基因编码的野生型2-岩藻糖基转移酶相比，所述变体具有以下氨基酸残基置换：天冬氨酸69置换为丝氨酸且异亮氨酸268置换为脯氨酸，或者组氨酸124置换为丙氨酸且谷氨酸215置换为甘氨酸；

所述重组微生物被转化以包含使重组微生物能够以蔗糖作为唯一碳源来生长的基因；

所述重组微生物被进一步修饰以具有失活的或严重减少的或者缺乏导致所产生的L-岩藻糖降解的分解代谢途径；和

所述重组微生物被进一步修饰以过表达至少一个涉及GDP-L-岩藻糖的生物合成的基因以提高L-岩藻糖的GDP-L-岩藻糖的供应；以及

b)在适于该重组微生物生长的培养基中培养所述重组微生物，其中所述重组微生物不能显著程度地代谢L-岩藻糖，以便L-岩藻糖在培养步骤期间累积；

其中所述重组微生物为大肠杆菌菌株、棒状杆菌属种(Corynebacterium spp.)、梭菌属种(Clostridium spp.)、芽孢杆菌属种(Bacillus spp.)、假单胞菌属种(Pseudomonasspp.)、乳杆菌属种(Lactobacillus spp.)或酵母属种(Saccharomyces sp.)菌株。

2.权利要求1的方法，其特征在于所述重组微生物被进一步修饰以具有失活的或严重减少的或者缺乏涉及L-岩藻糖分解代谢的基因。

3.权利要求1的方法，其特征在于至少一个涉及GDP-岩藻糖的生物合成的基因被过表达以提高GDP-岩藻糖的供应。

4.权利要求3的方法，其特征在于至少一个基因为异源的或同源的。

5.权利要求1的方法，其特征在于所述重组微生物被进一步修饰以具有失活的或减少的针对GDP-L-岩藻糖的竞争途径。

6.权利要求1的方法，其特征在于所述重组微生物在包含廉价碳源的培养基中培养，所述碳源选自甘油、蔗糖、葡萄糖、果糖、糖蜜(molasse)、木糖、纤维素、合成气、玉米糖浆或乳糖。