[发明专利]细胞的培养方法及试剂盒

说明书

本发明涉及细胞的培养方法及试剂盒。具体而言，涉及使用露出到空气的载体的细胞的培养方法及试剂盒。另外，涉及使细胞移动至聚酰亚胺多孔质膜上而进行培养的方法。

【技术领域】

本发明涉及细胞的培养方法及试剂盒。具体而言，涉及使用露出到空气的载体的细胞的培养方法及试剂盒。另外，涉及使细胞移动至聚酰亚胺多孔质膜上而进行培养的方法。

【背景技术】

【细胞培养】

细胞在生物体内一般作为三维的集团存在，但在经典的平面培养中，细胞粘着到容器的形式单层状培养。多数报告由培养环境的差异而细胞的性质也大不同。另外，对于在液体培养基中培养细胞的悬浮培养而言，不仅有适宜于悬浮培养的细胞，也有不适宜的细胞。

近年，使用培养细胞的疫苗、酶、激素、抗体、细胞因子等生物体内蛋白质等的产生或在再生医疗中的细胞移植等受到关注，与此伴随，效率并且简便地培养大量的细胞的方法论受到关注。在细胞培养中，不管使用不使用细胞培养用载体，另外，不管是悬浮细胞还是附着性细胞，除厌氧性细菌外，氧供给对于细胞的健全的培育而言是重要的课题。例如，当使用培养皿或板或室平面培养附着性细胞时，对于培养容器的面积而培养基量的适当范围有限制。因此，在不必要地使用大量的培养基时，不充分的氧供给于细胞，发生由低氧引起的障碍的情况或细胞死至的情况也可发生。另外知，当细胞组形成球形时，其尺寸变过大，则内部的细胞陷于氧不足(非专利文献1)。对于这样的氧供给课题，进行由微气泡的利用的氧浓度的提高(专利文献1)或在微载体培养中的均一的氧供给方法(专利文献2)等的尝试。

也进行将细胞培养用载体露出到气相而培养的方法的尝试。例如，对于中空丝培养中的液相/气相露出生物反应器(专利文献3)介绍了细胞生息的中空丝旋转交替露出于气相和液相的系统。另外，在实施细胞培养之上，关于操作等上优良的片型载体，也介绍了整体露出于气相的系统(专利文献4)，但具体的实施方式未特别指定。

如果载体在细胞培养时能暴露于气相，会由于大大改善细胞培养中的氧供给的问题，从而可成为对于确立有效的培养方法而言非常有魅力的方法论。但是，由于作为已知的细胞培养载体的纤维性原料无法避免干燥等，期望确立含该原料的新的“载体可暴露于气相的培养方法”。

细胞由其生存形态的特长，大分为悬浮细胞和附着性细胞的2种。在附着性细胞的培养中，在细胞分裂－增殖的过程中，由于该细胞成育的支架上存在有限的范围，进行增殖则自然无法免达其支架的增殖界限。这即使在标准的培养皿等的平面培养的情况中，即使是使用介质的3维培养，也都真实。

为了推进细胞的增殖，传代是必要不可或缺的，不管何用途－方法均是重要的作业，但用胰蛋白酶或胶原酶等处理细胞而从支架拆下，经细胞悬浮液再次接种的作业是伴随污染等的风险的大量作业的工，也有对细胞的应激也无法忽视的想法。

在作为利用介质的培养方法称为代表性的微载体培养中，达成在载体间的细胞的互动，终究是在微载体培养之中的处理，不是可跳出微载体所具有的形状或尺寸的规定性的方法，限于微载体的形态。

近年，在此微载体培养中，由京都大学－日产化学·NIPRO等的发明发明使用胶凝糖胶的ES及iPS细胞的大量培养法，发现了不经细胞悬浮液而使细胞传代的方法。其中，一边使称为球形的细胞块的形成在液中悬浮，一边进行，通过重复此球形的扩大和小块化，不经悬浮液而实现细胞培养，但限于形成球形的细胞，另外，为了防球形的集合化而需要详细的时机控制等，由于变得需要较多的工，不仅难说有效率，本质上也解决不了关于微载体培养所具有的形状的规定性。

一方面，在一般的培养方法中，知使用能拆下的橡胶状材料包被培养细胞的培养面的一部分，将向其移动的细胞连同包被拆下，移送到培养皿等而培养的方法论，但不过是能暂时移送，从称为向继续并且大量的细胞培养的展开的着眼点来看，未应对，也未解决课题。