[发明专利]在重组宿主中生产甜菊醇糖苷

权利要求书

1.能够在细胞培养物中生产甜菊醇糖苷、糖基化的对映贝壳杉烯醇化合物和/或糖基化的对映贝壳杉烯酸化合物的重组宿主细胞，所述重组宿主细胞包含：

编码能够选择性地将甜茶苷转化为甜菊苷并且具有SEQ ID NO:18所示氨基酸序列的多肽的基因；其中所述重组宿主细胞还包含以下的一个或更多个基因：

（a）编码能够对所述甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖或13-O-葡萄糖与19-O-葡萄糖二者的C2’进行β 1,2糖基化的第二多肽的第二基因，所述多肽具有SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；

（b）编码能够对甜菊醇或所述甜菊醇糖苷在其C-13羟基处进行糖基化的多肽的基因，所述多肽具有SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；

（c）编码能够对所述甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖或13-O-葡萄糖与19-O-葡萄糖二者的C3’进行β 1,3糖基化的多肽的基因，所述多肽具有SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列；和/或

（d）编码能够对甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-19羧基处进行糖基化的多肽的基因，其中所述多肽包含具有SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的多肽；

其中所述重组宿主细胞不是植物细胞或动物细胞。

2.权利要求1所述的重组宿主细胞，其中能够对甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖或13-O-葡萄糖与19-O-葡萄糖二者的C2’进行β 1,2糖基化的所述第二多肽包含具有选自以下的SEQ ID NO:11的氨基酸替换：S99I、T144L、T144M、M152T、L195G、L195C、L195S、L195N、L195V、V196P、K199C、L211H、L211M、L211C、L213E、V286C、V286N、V286S、G384W、G384K、G384Y、E438H、E438M、S221S、S221Y、T144K+P201P、P93V+M152G、A148K+L211I、L211M+E426G+A466V、L211T+I303I或S114F+V286S。

3.权利要求1或2所述的重组宿主细胞，其中能够对甜菊醇或甜菊醇糖苷在其C-13羟基处进行糖基化的所述多肽包含具有选自以下的SEQ ID NO:7的氨基酸替换：Q21L、Q21T、Q21V、F48S、F48H、F48Y、F48R、F48Q、F48W、F48T、I49V、S84G、S84A、S84C、S84V、P86R、P86G、I87H、I87P、I87Y、L91K、L91R或L92F。

4.权利要求1或2所述的重组宿主细胞，其中能够对甜菊醇糖苷的13-O-葡萄糖、19-O-葡萄糖或13-O-葡萄糖与19-O-葡萄糖二者的C3’进行β 1,3糖基化的所述多肽包含具有选自以下的SEQ ID NO:9的氨基酸替换：Q23H、I26W、T146G、H155L、L257G、S253W、T284G、S283N、K337P、T55K、Q23H+H155L、T146G+H155L、L257G+H155L或S283N+H155L。