[发明专利]干法蛋白质转移

说明书

本申请提供一种用于使用导电聚合物电极将生物大分子从电泳平板凝胶转移至印迹膜的试剂盒、系统和方法。

相关专利申请的交叉引用

本申请要求2015年2月10日提交的美国临时专利申请号62/114,387的优先权，该文的全部内容通过引用纳入本文。

背景技术

在平板凝胶中通过电泳分离的蛋白质、核酸或其它生物物质在鉴定和定量之前，常被转移至由硝酸纤维素、尼龙、聚二氟乙烯或类似材料制成的印迹膜。电印迹是一种常用的转移技术，其中，将凝胶和膜的平坦表面以直接接触的方式配置。然后，电流沿横向方向流过凝胶和膜，从而通过与物质在凝胶中移动的方式类似的方式将物质转移。当物质为DNA片段时，该转移被命名为Southern印迹，其开发者是英国生物学家Edwin M.Southern。以此类推，RNA片段的转移被命名为northern印迹，蛋白质或多台的转移被命名为western印迹。其它示例是针对翻译后修饰的“eastern”印迹和针对蛋白质相互作用的“far western”印迹。

电印迹可以湿、干或半干的形式进行。在湿法印迹中，凝胶和膜相互层叠成层叠体，将该层叠体浸渍在转膜槽内的转移缓冲液中，该转膜槽的壁上安装有导线或板状电极。随后对电极施加电压以使溶质从凝胶迁移至膜。在半干印迹中，将用转移缓冲液湿润的滤纸配置于层叠体的顶部和底部，将凝胶和膜夹在中间以形成“印迹夹心”。随后将电极配置成与湿润的滤纸的露出的表面直接接触。在干法电印迹中，不使用除凝胶中残留缓冲液以外的液体缓冲液。湿法、干法和半干电印迹的描述以及相关的材料和设备可见Margalit等(英杰公司(Invitrogen))的美国专利申请公开号US 2006/0272946 A1(2006年12月7日)、US 2006/0278531 A1(2006年12月14日)和US 2009/0026079 A1(2009年1月29日)；Littlehales(美国百奥奈特公司(American Bionetics))的美国专利号4,840,714(1989年6月20日)；Dyson等(安玛西亚国际公司(Amersham International))的美国专利号4,889,606(1989年12月26日)；Schuette(生命技术公司(LifeTechnologies,Inc.))的美国专利号5,013,420(1991年5月7日)；Chan等(雅培实验室公司(Abbott Laboratories))的美国专利号5,356,772(1994年10月18日)；Camacho(Hoefer科学仪器公司(Hoefer ScientificInstruments))的美国专利号5,445,723(2005年8月29日)；Boquet(伯齐公司(BertinCie))的美国专利号5,482,613(1996年1月9日)；以及Chen(威泰克企业有限公司(WealtecEnterprise Co.,Ltd.))的美国专利号6,592,734(2003年7月15日)。

在所有的电印迹形式中，有一种或多种水溶液与电泳凝胶或印迹膜接触，或者包含在电泳凝胶或印迹膜内。将金属(例如铂、银、铅、铜或铝)电极应用于电印迹时，在各电极与这些溶液的界面上发生电化学反应。该反应可包括水电解，该水电解在阳极生成O₂气体、氢离子和过氧化氢，并且在阴极生成H₂气体和氢氧根离子。电化学反应也可使电极电离，导致金属离子从电极表面释放至邻近的溶液中。这种反应的产物可与正在电泳凝胶和印迹膜之间进行转移的生物物质相互作用，使得这些物质被化学修饰(例如氧化或还原)、变性或丧失功能。电化学反应产物、尤其是由水电解生成的气体也可使电极的能够传输电流的表面积减小，并导致电印迹的效率降低。

发明内容

本申请提供一种用于通过电印迹将生物大分子从电泳平板凝胶转移至印迹膜的试剂盒、系统和方法。

在本发明的第一个方面，提供一种试剂盒。所述试剂盒包括两个导电聚合物电极，各电极包括基质和端子。所述基质包含导电聚合物混合物，该导电聚合物混合物包含共轭有机聚合物。所述端子与所述基质电连接，用于接收来自电源的电能。