[发明专利]层粘连蛋白用于使多能细胞分化成肝细胞谱系细胞的用途

权利要求书

1.层粘连蛋白(LN)作为肝分化基质的用途。

2.LN用于诱导和/或改善多能细胞群体、多潜能细胞群体或确定内胚层(DE)细胞群体分化成肝细胞谱系细胞群体的用途。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其中LN选自由层粘连蛋白-111(LN-111)、层粘连蛋白-211(LN-211)、层粘连蛋白-332(LN-332)、层粘连蛋白-411(LN-411)、层粘连蛋白-421(LN-421)、层粘连蛋白-511(LN-511)和层粘连蛋白-521(LN-521)组成的组。

4.根据权利要求1-3任一项所述的用途，其中LN是人重组LN-111或人重组LN-521或其混合物。

5.一种诱导人肝分化的方法，所述方法包括下述步骤：

(i)提供人确定内胚层(DE)细胞群体，和

(ii)在肝诱导培养基中、在用层粘连蛋白包被的支持物上培养人DE细胞群体以产生人成肝细胞样细胞群体，和

(iii)任选地在肝成熟培养基中、在用层粘连蛋白包被的支持物上培养所述人成肝细胞样细胞群体以产生肝细胞样细胞群体，优选人胚胎肝细胞样细胞。

6.一种诱导肝分化的方法，所述方法包括下述步骤:

(i)提供人多能细胞群体，

(ii)在内胚层诱导培养基中、在用层粘连蛋白包被的支持物上培养所述群体以产生人DE细胞群体，

(iii)在肝诱导培养基中、在用层粘连蛋白包被的支持物上培养所述人DE细胞群体以产生人成肝细胞样细胞群体，和

(iv)任选地在肝成熟培养基中、在用层粘连蛋白包被的支持物上培养所述人成肝细胞样细胞群体以产生肝细胞样细胞群体，优选人胚胎肝细胞样细胞。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其中所述肝诱导培养基是包含骨形态发生蛋白4(BMP4)和家族生长因子(FGF10)的化学成分确定的培养基。

8.根据权利要求5或6所述的方法，其中所述肝成熟培养基是包含肝生长因子(HGF)和制癌蛋白M(OSM)的化学成分确定的培养基。

9.根据权利要求6所述的方法，其中所述内胚层诱导培养基是至少包含激活素A且任选地包含WNT3A的化学成分确定的培养基。

10.根据权利要求5-9任一项所述的方法，其中所述肝诱导培养基和/或所述内胚层诱导培养基还包含ROCK抑制剂和/或CHIR99021。

11.通过权利要求5-10任一项所述的方法得到的人肝细胞样细胞群体。

12.通过权利要求5-10任一项所述的方法得到的人肝细胞样细胞群体，其中所述群体表达HNF4α且基本上表达AFP。

13.根据权利要求11或12所述的人肝细胞样细胞群体，其用于治疗人体的方法。

14.根据权利要求11-13任一项所述的人肝细胞样细胞群体，其中所述群体施用在脾中。

15.通过权利要求5-10任一项所述的方法得到的人胚胎肝细胞样细胞群体。

16.一种诱导人肝分化的试剂盒，所述试剂盒包含用层粘连蛋白包被的支持物和因子，所述因子包括BMP4、FGF家族的成员(FGF10或FGF2)和任选的HFG、OSM、激活素A、CHIR99021和WNT3A。