[发明专利]改性的肌酸酶

权利要求书

1.一种天然肌酸酶的突变多肽，其中所述多肽选自：

(1)突变体，其中对应于SEQ ID NO:2中的第175位和第299位的氨基酸残基中的每个被丙氨酸替换；

(2)突变体，其中对应于SEQ ID NO:2中的第175位和第299位的氨基酸残基中的每个被丙氨酸替换，并且对应于SEQ ID NO:2中的第268位的氨基酸残基被亮氨酸替换；和

(3)突变体，其中对应于SEQ ID NO:2中的第175位和第299位的氨基酸残基中的每个被丙氨酸替换，对应于SEQ ID NO:2中的第202位的氨基酸残基被苏氨酸替换，并且对应于SEQID NO:2中的第312位的氨基酸残基被赖氨酸替换，

其中所述天然肌酸酶的序列是SEQ ID NO:2。

2.一种分离的多核苷酸，其包含编码权利要求1所述的突变多肽的核苷酸序列。

3.一种包含权利要求2所述的多核苷酸的核酸构建体，所述多核苷酸可操作地连接至一个或多个指导在表达宿主中产生所述突变多肽的控制序列。

4.一种经基因修饰的宿主细胞，其包含编码权利要求1所述的突变多肽的核酸构建体。

5.根据权利要求4所述的经基因修饰的宿主细胞，其中所述经基因修饰的宿主细胞为细菌细胞、酵母细胞或真菌细胞。

6.一种用于产生权利要求1所述的突变多肽的方法，所述方法包括以下步骤：

a.提供重组宿主细胞，其中所述细胞包含DNA分子，所述DNA分子包含编码根据权利要求1所述的突变多肽的核酸序列，

b.在适于表达所述突变多肽的条件下孵育所述宿主细胞，以及

c.回收步骤b)中所述宿主细胞表达的突变多肽。

7.一种包含根据权利要求1所述的突变多肽的组合物，其中所述组合物被配制成干粉、片剂或液体。

8.根据权利要求7所述的组合物，其还包含：

a.分类为EC 1.5.3.1的肌氨酸氧化酶；或者

b.分类为EC 3.5.2.10的肌酸酐酶和分类为EC 1.5.3.1的肌氨酸氧化酶。

9.根据权利要求1所述的突变多肽或根据权利要求7或8所述的组合物作为在传感器中的试剂的用途，所述传感器用于测定肌酸酐和/或肌酸，其中所述突变多肽或所述组合物与包含硫醇灭活剂的冲洗溶液联合使用。

10.一种用于测定样本流体中的肌酸酐和/或肌酸的传感器，其包括至少一个具有表面的电极，并且在所述至少一个电极表面上固定有多种酶，并且其中所述酶中的至少一种是根据权利要求1所述的突变多肽。

11.根据权利要求10所述的用于测定肌酸酐和/或肌酸的传感器，其中所述传感器选自：

a.包含分类为EC 3.5.3.3的肌酸酶和分类为EC 1.5.3.1的肌氨酸氧化酶的肌酸传感器；

b.包含分类为EC 3.5.3.3的肌酸酶、分类为EC 3.5.2.10的肌酸酐酶和分类为EC1.5.3.1的肌氨酸氧化酶的肌酸酐传感器；以及

c.包括所述肌酸传感器(a)和所述肌酸酐传感器(b)两者的双传感器。

12.一种制备用于测定样本流体中的肌酸酐和/或肌酸的传感器的方法，所述方法包括使包含多种酶的含水混合物沉积到电极表面的步骤；其中所述酶中的至少一种是根据权利要求1所述的突变多肽。