[发明专利]条件活性生物蛋白

权利要求书

1.一种制备条件活性生物蛋白的方法，其中所述条件活性生物蛋白为在正常生理条件下的测试中表现出与所述条件活性生物蛋白在异常条件下的测试中的活性相比较低的活性的蛋白，所述方法包括以下步骤：从野生型蛋白库中选择条件活性生物蛋白，其中所述条件活性生物蛋白在正常生理条件下的测试中表现出与所述条件活性生物蛋白在异常条件下的测试中的活性相比较低的活性。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述选择步骤包括选择表现出以下两种特性的条件活性生物蛋白：(a)在正常生理条件下的测试中较参考蛋白活性下降，和(b)在异常条件下的测试中较参考蛋白活性增强，其中参考蛋白在正常生理条件和异常条件下的测试中具有实质上相同的活性。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述野生型蛋白为野生型抗体。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述野生型蛋白库为由cDNA编码的蛋白的集合。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述野生型蛋白库为噬菌体展示文库。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述野生型蛋白库为重组蛋白的集合。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所选的条件活性生物蛋白经历以下步骤：

i.使用一种或多种演变技术演变编码所选的条件活性生物蛋白的DNA以产生突变DNA；

ii.表达突变DNA以获得突变蛋白；以及

iii.从突变蛋白中选择改进的、显示以下两种特性的条件活性生物蛋白：(a)在正常生理条件下的测试中较所选的条件活性生物蛋白活性下降，和(b)在异常条件下的测试中较所选的条件活性生物蛋白活性增强。

8.根据权利要求7所述的方法，其中与步骤(i)中使用的所选的条件活性生物蛋白相比，改进的条件活性生物蛋白在异常条件下的测试中的活性与正常生理条件下的活性的比值增大。

9.根据权利要求7所述的方法，其中与步骤(i)中使用的所选的条件活性生物蛋白相比，改进的条件活性生物蛋白具有改进的结合亲和力、改进的表达和改进的人源化中的一种或多种。

10.一种制备条件活性生物蛋白的方法，其中所述条件活性生物蛋白为表现出以下两种特性的蛋白：(a)在正常生理条件下的测试中较野生型生物蛋白活性下降，和(b)在异常条件下的测试中较野生型生物蛋白活性增强，所述方法包括以下步骤：

i.选择野生型生物蛋白；

ii.使用一种或多种演变技术演变编码野生型生物蛋白的DNA来产生突变DNA；

iii.表达突变DNA以获得突变蛋白，其中至少一种突变蛋白表现出以下两种特性：(a)在正常生理条件下的测试中较野生型生物蛋白活性下降，和(b)在异常条件下的测试中较野生型生物蛋白活性增强；以及

iv.从突变蛋白中选择表现出以下两种特性的条件活性生物蛋白：(a)在正常生理条件下的测试中较野生型生物蛋白活性下降，和(b)在异常条件下的测试中较野生型生物蛋白活性增强，

其中在正常生理条件下的测试和在异常条件下的测试在含有选自无机化合物、离子和有机分子的至少一种组分的测试溶液中进行。

11.根据权利要求10所述的方法，其中在用于正常生理条件下的测试的测试溶液中和用于异常条件下的测试的测试溶液中，所述至少一种组分具有实质上相同的浓度。

12.根据权利要求10所述的方法，其中所述至少一种组分以正常生理浓度存在于哺乳动物的体液中。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述至少一种组分的浓度范围为正常生理浓度的约5％至约500％，或正常生理浓度的约10％至约400％，或正常生理浓度的约30％至约300％，或正常生理浓度的约50％至约200％，或正常生理浓度的约75％至约150％。

14.根据权利要求10所述的方法，其中所述无机化合物选自硼酸、氯化钙、硝酸钙、磷酸二铵、硫酸镁、磷酸一铵、磷酸一钾、氯化钾、硫酸钾、硫酸铜、硫酸铁、硫酸锰、硫酸锌、硫酸镁、硝酸钙、钙螯合物、铜螯合物、铁螯合物、铁螯合物、锰螯合物、锌螯合物、钼酸铵、硫酸铵、碳酸钙、磷酸镁、碳酸氢钾、硝酸钾、盐酸、二氧化碳、硫酸、磷酸、碳酸、尿酸、氯化氢、尿素、磷离子、硫酸离子和氯离子。