[发明专利]逆转录病毒载体和慢病毒载体

权利要求书

1.具有病毒包膜的逆转录病毒或慢病毒载体，所述病毒包膜包含：

(i)促有丝分裂T细胞活化跨膜蛋白，其包含促有丝分裂结构域和跨膜结构域；和/或

(ii)基于细胞因子的T细胞活化跨膜蛋白，其包含细胞因子结构域和跨膜结构域

其中所述促有丝分裂T细胞活化跨膜蛋白或基于细胞因子的T细胞活化跨膜蛋白不是病毒包膜糖蛋白的一部分。

2.根据权利要求1的病毒载体，其包含结合CD3、CD28、CD134或CD137的促有丝分裂T细胞活化跨膜蛋白。

3.根据权利要求2的病毒载体，其中所述促有丝分裂T细胞活化跨膜蛋白包含来自OKT3、15E8、TGN1412、OX40L或41BBL的结合结构域。

4.根据权利要求1的病毒载体，其在所述病毒包膜中包含两个或更多个促有丝分裂T细胞活化跨膜结构域。

5.根据权利要求4的病毒载体，其包含结合CD3的第一促有丝分裂T细胞活化跨膜蛋白和结合CD28的第二促有丝分裂T细胞活化跨膜蛋白。

6.根据前述权利要求任一项的病毒载体，其包含基于细胞因子的T细胞活化跨膜蛋白，所述基于细胞因子的T细胞活化跨膜蛋白包含选自IL2、IL7和IL15的细胞因子。

7.根据前述权利要求中任一项的病毒载体，其包含产生假性化病毒载体的异源病毒包膜糖蛋白。

8.根据权利要求7的病毒载体，其中所述包膜糖蛋白来自RD114或其变体之一，VSV-G，长臂猿白血病病毒(GALV)，或是双嗜性(Amphotropic)包膜糖蛋白、麻疹(Measles)包膜糖蛋白，或狒狒逆转录病毒包膜糖蛋白。

9.根据前述权利要求中任一项的病毒载体，其中所述病毒包膜还包含：

(iii)标签化蛋白，所述标签化蛋白包含：

结合捕获部分的结合结构域；和

跨膜结构域

通过所述标签化蛋白对所述捕获部分的结合，所述标签化蛋白促进所述病毒载体从细胞上清液的纯化。

10.根据权利要求9的病毒载体，其中所述标签化蛋白的所述结合结构域包含一个或多个链霉亲合素结合表位。

11.根据权利要求10的病毒载体，其中所述链霉亲合素结合表位是生物素模拟物。

12.根据权利要求11的病毒载体，其中所述生物素模拟物以比生物素低的亲和力结合链霉亲合素，使得生物素可以用于洗脱由包装细胞产生的链霉素捕获的逆转录病毒载体。

13.根据权利要求12的病毒载体，其中所述生物素模拟物选自下组：StreptagII(SEQ ID NO:36)、Flankedccstretag(SEQ ID NO:37)和ccstreptag(SEQ ID NO:38)。

14.根据前述权利要求中任一项的病毒载体，其包含编码T细胞受体或嵌合抗原受体的核酸序列。

15.根据前述权利要求中任一项的病毒载体，其是病毒样颗粒(VLP)。

16.宿主细胞，其在细胞表面表达：

(i)促有丝分裂T细胞活化跨膜蛋白，其包含促有丝分裂结构域和跨膜结构域；和/或

(ii)基于细胞因子的T细胞活化跨膜蛋白，其包含细胞因子结构域和跨膜结构域

使得由所述宿主细胞产生的逆转录病毒或慢病毒载体如权利要求1至8任一项中所定义的。

17.根据权利要求16的宿主细胞，其在细胞表面还表达：

(iii)标签化蛋白，其包含：

结合捕获部分的结合结构域；和

跨膜结构域

通过所述标签化蛋白对所述捕获部分的结合，所述标签化蛋白促进所述病毒载体从细胞上清液的纯化，使得由包装蛋白产生的逆转录病毒或慢病毒载体是如权利要求9至14中任一项中所定义的。

18.包装细胞，其是如权利要求16或17中定义的宿主细胞，所述包装细胞还包含一种或多种以下基因：gag、pol、env和/或rev。

19.生产细胞，其是如权利要求16或17中定义的宿主细胞，其包含gag、pol、env和任选的rev基因，且还包含逆转录病毒或慢病毒基因组。