[发明专利]包含CD19结合域的嵌合抗原受体(CAR)

说明书

提供了包含CD19结合域的嵌合抗原受体(CAR)，所述CD19结合域包含a)重链可变区(VH)，所述重链可变区具有含有以下序列的互补决定区(CDR)：CDR1–GYAFSSS(SEQ ID No.1)；CDR2–YPGDED(SEQ ID No.2)CDR3–SLLYGDYLDY(SEQ ID No.3)；和b)轻链可变区(VL)，所述轻链可变区具有含有以下序列的CDR：CDR1–SASSSVSYMH(SEQ ID No.4)；CDR2–DTSKLAS(SEQ ID No.5)CDR3–QQWNINPLT(SEQ ID No.6)。还提供了包含此类CAR的细胞，和此类细胞在治疗癌症，特别地B细胞恶性肿瘤中的用途。

发明领域

本发明涉及结合B淋巴细胞抗原CD19(分化簇19)的嵌合抗原受体(CAR)。表达此类CAR的T细胞可用于治疗癌性疾病，如B细胞白血病和淋巴瘤。

发明背景

嵌合抗原受体

传统上，抗原特异性T细胞是通过天然对靶抗原特异性的外周血T细胞的选择性扩增产生的。然而，选择和扩增对大多数癌症抗原特异性的大量T细胞是困难且常常是不可能的。使用整合载体的基因治疗为我们提供了这个问题的解决方法：嵌合抗原受体(CAR)的转基因表达允许通过外周血T细胞的混合群体(bulk population)的离体病毒载体转导容易地产生对任何表面抗原特异性的大量T细胞。

这些分子的最常见形式是源自识别靶抗原的单克隆抗体的单链可变片段(scFv)经由间隔物和跨膜域融合到信号传导胞内域(endodomain)的融合物。此类分子响应由scFv对其关联靶物的识别而导致T细胞的活化。当T细胞表达此类CAR时，它们识别并杀死表达靶抗原的靶细胞。已经开发了针对肿瘤相关抗原的几种CAR，并且使用此类表达CAR的T细胞的过继转移方法目前在用于治疗各种癌症的临床试验中。然而，迄今为止，CAR疗法的主要临床探索和潜在应用是B细胞恶性的治疗。

针对CD19的CAR

CD19是一种B细胞抗原，其在B细胞分化中非常早地表达，并且仅在末端B细胞分化为浆细胞时丧失。因此，除了多发性骨髓瘤之外，所有B细胞恶性肿瘤上都表达CD19。它不在其它造血群体或非造血细胞上表达，因此靶向该抗原不应导致对骨髓或非造血器官的毒性。在治疗淋巴样恶性肿瘤时，正常B细胞区室的损失被认为是可接受的毒性，因为虽然有效的CD19 CAR T细胞疗法将导致B细胞不发育(aplasia)，因此可以用合并的免疫球蛋白治疗随后的低丙种球蛋白血(hypogammaglobulinaemia)。

因此，CD19是有吸引力的CAR靶物。到目前为止，CAR领域的主要临床焦点是靶向难治性B细胞癌上的CD19的研究，如表1中汇总。

已经在不同的中心针对CD19测试了CAR的不同设计，如表1中概述：

表1：靶向CD19的CAR经验的汇总

大多数研究测试了基于源自杂交瘤fmc63的scFv的CD19 CAR。最有希望的是治疗急性成淋巴细胞性白血病(ALL,Acute Lymphoblastic Leukaemia)。

针对CD19的CAR的临床经验

CD19指导性CAR疗法在ALL中表现最为有效。Memorial Sloane Kettering(Brentjens,et al.(2013)Leukemia.Sci.Transl.Med.5,177ra38)和宾夕法尼亚大学的团队在2013年春季发表了ALL的第一项研究。最近已经进行了后一研究的更新报告(Maude etal.(2014)N.Engl.J.Med.371,1507–1517)。这里，治疗了25岁龄下的25名患者和超过此年龄的5名患者。90％在一个月时实现了完全响应，并且28例可评估病例的22例实现了MRD阴性状态，并且6个月无事件存活率为67％。研究后15例患者不接受进一步疗法。