[发明专利]固体载体上的官能团的定量

说明书

发明领域

本发明涉及诊断测试领域，更特别涉及定量固定化在固体载体上的官能团的方法。

发明背景

在医学和临床化学领域中，通过利用特异性结合对成员之间的相互作用进行生理活性物质或被分析物的许多研究和测定。例如，患者样品中的目标被分析物本身可以是特异性结合对的一个成员，其可以通过使用固定化在固体载体上的特异性结合对的相应成员检测。在这种情况下，例如，固定化的结合对成员可以是用于检测样品中的目标抗体的抗原。已经为这些应用开发出各种固体载体材料并且需要各种结合技术将特异性结合对成员固定化在固体载体上。

例如，顺磁粒子（PMP）是已知的固体载体材料，其可以用官能团如胺官能团官能化。在一些情况下，可以选择这些官能团以与键合在结合对成员上的连接基（例如戊二醛）键合。该结合对成员可能对样品中的目标被分析物（其通常是如上文提到的结合对的第二成员）有选择性。在将该结合对成员固定化在固体载体上时，可能必须确保适当量的官能团可供直接或间接连接该结合对成员。例如，太少的可用官能团可能导致在加入结合对成员时太少的连接位点。这可能导致固体载体不能准确测定在特定浓度下，特别是在目标被分析物的可检测范围内的较高浓度下的目标被分析物的量。另一方面，提供更高浓度的用于固定化特异性结合成员的官能团可能显著提高生产成本而没有任何额外益处。

因此，需要测定和/或确认直接或间接存在于固体载体上的官能团数以将特异性结合对成员优化固定化到固体载体上。尽管存在定量测定溶液中的官能团量的已知方法，但此类方法通常不适合固体载体，因为在此类定量方法中形成的有色或荧光反应产物通常结合到固体载体上，由此使检测和定量困难和/或不可能。

附图简述

在下列说明书中结合附图解释本发明的方面，所述附图显示：

图1图示说明根据本发明的一个方面的具有固定化在其上的用于检测样品中的第二互补结合对成员的第一结合对成员的现有技术固体载体。

图2图示说明根据本发明的一个方面的具有表面官能团和结合到该表面官能团上的选择性化合物的固体载体。

图3图示说明根据本发明的一个方面的包含结合到指示剂上的选择性化合物的上清液。

图4图示说明根据本发明的一个方面的具有连接剂和结合到连接剂上的选择性化合物的固体载体。

图5图示说明根据本发明的一个方面的测定固体载体上的官能团数的方法。

图6是显示根据本发明的一个方面的丙醛标样浓度与吸光度的图。

图7是显示根据本发明的另一方面的来自时间依赖性研究的样品上清液的吸光度的图。

图8是显示根据本发明的另一方面的丙醛标样浓度与吸光度的图。

图9是显示根据本发明的一个方面的用于醛定量的席夫碱形成的时间依赖性的图。

图10是显示根据本发明的一个方面的丙胺标样浓度与吸光度的图。

图11是指示根据本发明的一个方面的作为醛基团形成的主要因子的%戊二醛的效果图。

图12是显示根据本发明的另一方面的与%容器占有率（vessel occupancy）相交的PMP mg/mL的相互作用图。

图13是图示说明根据本发明的另一方面的作为醛基团形成的主要效果的B（%戊二醛）的帕累托图。

图14图示说明根据本发明的另一方面的最佳PMP浓度、戊二醛浓度和容器占有率以优化PMP上的醛载量。

发明详述

根据本发明的一个方面，提供定量固定化在固体载体上的官能团的量的方法。在某些方面中，该方法能够测定在固体载体产品的制造过程中待布置在固体载体上的官能团的最佳数量。由此可以消除和/或减少浪费，并可以改进固体载体的性能。例如，通过定量固体载体上可用的官能团数，可以保证足够的官能团可供直接或间接连接特异性结合对的第一成员。此后，可以制造具有特异性结合对成员的最佳载量的类似固体载体。在某些实施方案中，本文所述的方法因此能够在直接或间接连接在固体载体上提供的特异性结合对的一个成员之前定量可用官能团。

本文所用的术语“大约”是指指定值的± 10%的值。

本文所用的术语“附加”、“结合”、“固定化”、“连接”等被理解为不限于共价键合并且可包括两个或更多个分子之间的任何类型的吸引、亲合、构象选择、诱导契合或键合。

本文所用的短语“有效量”是指适合带来预期结果的材料量。

本文所用的术语“样品”包括具有或疑似具有目标被分析物的任何样品并且可以是生物或非生物样品。