[发明专利]包含珠蛋白基因簇的调控元件的真核表达载体

权利要求书

1.一种用于重组生产目标多肽的方法，包括以下步骤：

(a)提供宿主细胞，所述宿主细胞包含表达盒，所述表达盒包含功能上彼此相连的以下元件：

(i)至少包含人β-珠蛋白基因簇的DNA酶I超敏感位点2(HS2)的核心元件的基因座控制区；

(ii)包含人^Aγ珠蛋白基因的启动子的至少功能部分的启动子区；以及

(iii)包含编码所述目标多肽的核酸序列的编码区；

(b)在所述宿主细胞表达所述目标多肽的条件下培养所述宿主细胞；以及

(c)分离所述目标多肽；

其中所述编码区不包含编码珠蛋白或其包含珠蛋白至少20个连续氨基酸的部分的核酸序列，和

其中所述基因座控制区不包含人β-珠蛋白基因簇的超敏感位点3(HS3)。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述表达盒的所述编码区还包含编码用于分泌表达的信号肽的核酸序列，并且其中在步骤(b)中所述目标多肽由所述宿主细胞分泌。

3.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(c)后还包括以下步骤：

(d)将所述目标多肽配制为药物组合物。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述表达盒的所述基因座控制区包含人β-珠蛋白基因簇的具有SEQ ID NO:1中位置906至939所示核酸序列的DNA酶I超敏感位点2(HS2)的核心元件。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述表达盒的所述基因座控制区包含人β-珠蛋白基因簇的具有SEQ ID NO:1中位置742至995所示核酸序列的DNA酶I超敏感位点2(HS2)的M1-核心-M2元件。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述表达盒的所述基因座控制区包含人β-珠蛋白基因簇的超敏感位点2(HS2)的至少一部分，所述部分包含SEQ ID NO:1中位置741至1109的核酸序列。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述表达盒的所述启动子区包含转录起始位点以及任选地人^Aγ珠蛋白基因的5'非翻译区的至少一部分。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述表达盒的所述启动子区包含人^Aγ珠蛋白基因中相对于转录起始位点而言的核苷酸-384至+36，以及/或者SEQ ID NO:1中位置1123至1542的核酸序列。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述表达盒还包含转录终止子区。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述转录终止子区包含多聚腺苷酸化信号，以及转录终止位点。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述多聚腺苷酸化信号包含SEQ ID NO:1中位置1725至1730的核酸序列。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述表达盒还包含增强子区，所述增强子区包含与所述表达盒的其它元件在功能上连接的人^Aγ珠蛋白基因的3'增强子的至少功能部分。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述表达盒的所述增强子区包含SEQ ID NO:1中位置2136至2881的核酸序列。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述目标多肽是糖蛋白或其部分。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述目标多肽选自：抗体或其衍生物或部分；促性腺激素；红细胞生成素；和血液凝固因子。