[发明专利]用于制备用于探测蛋白质错误折叠病症的蛋白质凝聚物的标准样品的方法以及标准样品和其使用

说明书

本发明涉及一种用于制备用于探测蛋白质错误折叠病症的蛋白质凝聚物的标准样品，带有如下步骤：A)提供带有蛋白质错误折叠病症的凝聚物大小的无机纳米颗粒，B)在纳米颗粒表面处形成游离的氨基或游离的羧基，(以用于使纳米颗粒表面官能化成氨基官能化或羧基官能化的纳米颗粒)C)i)将马来酰亚胺‑间隔基‑羧酸结合到步骤B)中的游离氨基中，或者ii)将步骤B)中的游离的羧基转变为NHS酯，D)将蛋白质凝聚物的单体i)经由在单体自由端处的氢硫基结合到马来酰亚胺‑间隔基‑羧酸处，或ii)经由在单体的自由端处的氨基结合到NHS酯处。本发明的对象是一种标准样品以及其在探测在蛋白质错误折叠病症的情况中出现的蛋白质凝聚物的情形中的使用。

技术领域

本发明涉及一种用于制备用于探测蛋白质错误折叠病症的蛋白质凝聚物的标准样品的方法以及像这样的标准样品和其使用。

背景技术

概念蛋白质错误折叠病症是由于错误折叠的、凝聚的蛋白质所引起的病症的综合概念。医学上尤其相关的是神经退化的病症例如阿尔茨海默痴呆症(AD)和帕金森病症。蛋白质错误折叠病症的诊断大多受限于临床症状的分析并且在死后才可通过组织病理学说地探测蛋白质凝聚物提供可靠性。颇有前途的基于生物标记的诊断方法直接探测了体液中的病理学的蛋白质凝聚物。该方法不仅必须尤其地灵敏，而且能区分单体与凝聚的蛋白质构象。通常该方法涉及所谓的免疫性探测、即涉及经由抗原/抗体结合来分离或检测蛋白质凝聚物。为了将蛋白质凝聚物作为生物标记定量地来确定，需要在该方法中使用内标。由公开文献WO2013/092951 A2已知一种用于量化来自内生蛋白质的病理学上的凝聚物或低聚物，其标示出蛋白质凝聚病症或或淀粉质退化或蛋白质错误折叠病症。其特征在于，聚合物由多肽序列构成。其在其序列方面在相应的部分区域中与内生蛋白质相同或者在相应的部分区域上与如下内生蛋白质具有至少50%的同系现象(Homologie)，即，所述内生蛋白质标示出蛋白质凝聚病症或淀粉质退化或蛋白质错误折叠病症，其中，聚合物不凝聚。抗原决定基的数量由此来确定，即使用在其序列方面与内生蛋白质的如下部分区域相同的多肽序列，即，所述部分区域形成抗原决定基或与该部分区域具有至少50%的同系现象，并且在此具有抗原决定基的生物活性。在构建根据本发明的标准样品的情况中将如此选出的多肽序列以期望的数量装入和/或根据本发明相互接合。该标准样品适用于确定病理学凝聚物或低聚物的实际数量。

缺点是，该标准样品仅可受限地使用。

此外，凝聚物标准样品可由重组的或合成的Aβ来制备。在此，在适合的缓冲剂环境下诱导出Aβ的凝聚。于是，不同的凝聚物种(Aggregatspezies)可经由特定的离心分离技术或色层分离技术来提纯。此外为了使凝聚物稳定化，可附加地提供用于化学横向交联的方法，例如所谓的GraFix-法(Kastner等人，2008，Stark 2010)。

因此缺点是，至今所有用于确定在蛋白质错误折叠病症中出现的病理学的蛋白质凝聚物和低聚物的标准样品仅可受限地使用。

发明内容

本发明的任务在于提供一种标准样品，其不具有现有技术的缺点并且可长期使用且可尤其广泛地用作用于探测不同的蛋白质错误折叠病症的标准样品。本发明的另一任务在于提供一种用于制备该标准样品的方法并且说明该标准样品的有利的使用。

本发明的任务利用根据独立权利要求的用于制备标准样品的方法、根据并列权利要求的标准样品本身以及该标准样品的使用来解决。有利的设计方案由从属权利要求得出。

根据本发明的用于制备用于探测蛋白质错误折叠病症的蛋白质凝聚物的标准样品的方法具有以下步骤：

A)提供带有蛋白质错误折叠病症的凝聚物大小的无机纳米颗粒。

B)在纳米颗粒表面形成游离的氨基或游离的羧基，(以用于将纳米颗粒表面官能化成氨基官能化或羧基官能化的纳米颗粒)。

C) i)将马来酰亚胺-间隔基-羧酸结合到步骤B)中的游离的氨基处，或