[发明专利]用于预测屈光不正素因的方法和试剂

权利要求书

1.用于确定受试者中由一个或多个视蛋白基因转录的与外显子3跳跃的视蛋白基因mRNA相比的全长外显子3视蛋白基因mRNA的相对量的方法，其中所述外显子3跳跃的视蛋白基因mRNA即EX3(-)视蛋白基因mRNA，所述方法包括：

(a)由从所述受试者获得的生物样品分离基因组DNA；

(b)由所述基因组DNA表达外显子3和内含子侧翼外显子3视蛋白基因以由所述受试者生成视蛋白基因mRNA；

(c)分离所述视蛋白基因mRNA；

(d)逆转录所述视蛋白基因mRNA以生成视蛋白基因cDNA；

(e)用跨越所述一个或多个视蛋白基因的外显子3的PCR引物由所述视蛋白基因cDNA生成扩增产物，其中所述扩增产物包括代表全长视蛋白基因mRNA的第一扩增产物群和代表EX3(-)视蛋白基因mRNA的第二扩增产物群；

(f)检测代表全长视蛋白基因mRNA的第一扩增产物群的量和代表EX3(-)视蛋白基因mRNA的第二扩增产物群的量；和

(g)将代表全长视蛋白基因mRNA的所述第一扩增产物群的量和代表EX3(-)视蛋白基因mRNA的所述第二扩增产物群的量进行比较，以确定所述受试者中全长视蛋白基因mRNA相对于EX3(-)mRNA的相对量。

2.权利要求1所述的方法，其中所述生物样品是唾液或血液。

3.权利要求1所述的方法，其中检测所述扩增产物包括使用与邻近外显子3的末端的所述扩增产物结合的引物从所述扩增产物产生引物延伸产物。

4.权利要求3所述的方法，其中通过MALDI-TOFF质谱法检测所述引物延伸产物。

5.权利要求1所述的方法，进一步包括，在所述由所述基因组DNA表达外显子3和内含子侧翼外显子3视蛋白基因以生成视蛋白基因mRNA之前，将外显子3和内含子侧翼外显子3视蛋白基因由所述基因组DNA克隆到表达载体中。

6.权利要求1所述的方法，其中所述检测包括使所述扩增产物与探针接触，所述探针与代表全长L-视蛋白基因和/或M-视蛋白基因mRNA的所述第一扩增产物群以及代表EX3(-)L-视蛋白基因和/或M-视蛋白mRNA的所述第二扩增产物群的至少一部分具有全序列互补性，其中所述接触在适合于所述探针与所述扩增产物杂交的条件下发生。

7.权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述一个或多个视蛋白基因包括L-视蛋白基因。

8.权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述一个或多个视蛋白基因包括M-视蛋白基因。

9.用于确定受试者中由一个或多个视蛋白基因转录的与外显子3跳跃的视蛋白基因mRNA相比的全长外显子3视蛋白基因mRNA的相对量的组合物，其中所述外显子3跳跃的视蛋白基因mRNA即EX3(-)视蛋白基因mRNA，所述组合物包括下列或由下列组成：

(a)能够选择性扩增一个或多个人视蛋白基因的可检测部分的引物对，其中所述可检测部分包括外显子3，并且其中所述引物对能够扩增(I)对应于全长视蛋白基因mRNA的PCR产物和(II)对应于EX3(-)mRNA的PCR产物；和

(b)与(I)对应于全长视蛋白基因mRNA的PCR产物和(II)对应于EX3(-)mRNA的PCR产物具有完全序列互补性的探针。

10.权利要求9所述的组合物，其中所述引物对包括：

(a)第一引物，包括SEQ ID NO：14或其完全互补物；和

(b)第二引物对,包括SEQ ID NO：15或其完全互补物。

11.权利要求9所述的组合物，其中所述引物对包括：

(a)第一引物，包括SEQ ID NO：11或其完全互补物；和

(b)第二引物对，包括SEQ ID NO：12或其完全互补物。