[发明专利]用于分析细胞组分的方法和组合物

权利要求书

1.分析多个单细胞的至少两个或更多个分析物的方法，所述方法包括：

(a) 提供多个邻近保留元件CE，其中每个CE包含单细胞；

(b) 在每个CE内裂解所述单细胞，其中在所述单细胞内的所述分析物在每个CE内释放；

(c) 将所述CE分隔成多个第一隔室，其中每个隔室包含多个CE；

(d) 向每个CE的所述单细胞内的第一分析物提供第一报告物部分，其中对每个隔室的所述第一分析物提供的所述第一报告物部分不同于对每个其它隔室的所述第一分析物提供的所述第一报告物部分；

(e) 向每个CE的所述单细胞内的第二分析物提供第二报告物部分，其中对每个隔室的所述第二分析物提供的所述第二报告物部分不同于对每个其它隔室的所述第二分析物提供的所述第二报告物部分；

(f) 修饰所述分析物，使得所述CE的所述第一和第二分析物的至少一些分别包含所述第一和第二报告物部分；

(g) 组合包含所述分析物的CE，所述分析物包含所述报告物部分；

(h) 将包含所述第一和第二分析物的CE分隔成多个隔室，所述第一和第二分析物分别包含所述第一和第二报告物部分，其中每个隔室包含多个CE；

(i) 向所述隔室内每个CE的包含所述第一报告物部分的所述第一分析物提供第三报告物部分，其中对每个隔室的所述第一分析物提供的所述第三报告物部分不同于对每个其它隔室的所述第一分析物提供的所述第三报告物部分；

(j) 向所述隔室内每个CE的包含所述第二报告物部分的所述第二分析物提供第四报告物部分，其中对每个隔室的所述第二分析物提供的所述第四报告物部分不同于对每个其它隔室的所述第二分析物提供的所述第四报告物部分；

(k) 进一步修饰所述分析物，使得至少一些第一分析物包含所述第一和第三报告物部分以及至少一些第二分析物包含所述第二和第四报告物部分；

(l) 分析每个隔室的包含所述报告物部分的所述分析物，其中此类分析检测作为每个分析物的来源的单细胞；

其中所述第一分析物是基因组DNA并且所述第二分析物是cDNA或RNA；并且其中修饰基因组DNA、cDNA或RNA的至少一些以包含第一和第二报告物部分包括在条件下将基因组DNA、cDNA或RNA与多个转座体相接触，每个转座体包含转座酶和包含第一报告物部分或第二报告物部分的转座子序列，使得将所述转座子序列的至少一些插入到所述基因组DNA、cDNA或RNA中；

其中步骤(f)包括将核酸与多个转座体接触，每个转座体含有包含第一报告物部分的第一转座子序列、与所述第一转座子序列不连续的第二转座子序列以及与所述第一转座子序列和所述第二转座子序列缔合的转座酶。

2.权利要求1的方法，其中所述第一和第二报告物部分鉴定所述分析物的来源，或其中所述报告物部分的组合鉴定所述分析物的来源。

3.权利要求1-2中任一项的方法，其中同时进行所述分析物的检测。

4.权利要求1的方法，其中步骤(h)还包括从所述基因组DNA、cDNA或RNA除去转座酶。

5.权利要求4的方法，其中在步骤(f)修饰所述分析物后除去所述转座酶。

6.权利要求5的方法，其中除去转座酶包括选自下组的方法：添加去污剂、改变温度、改变pH、添加蛋白质酶、添加蛋白质伴侣、改变盐浓度，以及添加链置换聚合酶。

7.权利要求4-6中任一项的方法，其中所述第一转座子序列包含第一引物位点并且所述第二转座子序列包含第二引物位点。

8.权利要求7的方法，其中所述第一引物位点还包含第一条形码并且所述第二引物位点还包含第二条形码。

9.权利要求1的方法，其中一个分析物是蛋白质，并且任选地其中用核酸报告物部分标记所述蛋白质，并且进一步任选地其中所述核酸报告物部分包含组合衍生的条形码集；其中所述蛋白质来自单细胞。