[发明专利]皮肤重建方法

权利要求书

1.一种用于制备皮肤替代品的方法，包括以下步骤：

a.在成纤维细胞培养介质M1中培养成纤维细胞；

b.将由步骤a产生的成纤维细胞接种在包含胶原蛋白的基质中；

c.在包含抗坏血酸或其衍生物的成纤维细胞培养介质M2中培养接种在包含胶原蛋白的基质中的成纤维细胞，所述包含胶原蛋白的基质和培养的成纤维细胞形成真皮替代品；

d.在黑色素细胞培养介质M3中培养黑色素细胞；

e.在角化细胞培养介质M4中培养角化细胞；

f.混合在步骤d中得到的黑色素细胞与在步骤e中得到的角化细胞；

g.用在步骤f中得到的混合物接种在步骤c中得到的真皮替代品，其中以9至19的(角化细胞+黑色素细胞)/成纤维细胞比值进行所述接种；

h.在皮肤培养介质M5中培养在步骤g中接种的真皮替代品，从而形成所述皮肤替代品。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述皮肤培养介质M5包含透明质酸或其衍生物。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述透明质酸的衍生物为透明质酸盐。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述皮肤培养介质M5包含抗坏血酸或其衍生物。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中以1/20至1/15的黑色素细胞/角化细胞比值进行步骤f的黑色素细胞和角化细胞的混合。

6.根据权利要求1或4所述的方法，其中所述抗坏血酸的衍生物为抗坏血酸盐。

7.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中以20000至50000成纤维细胞/cm²包含胶原蛋白的基质的表面积的密度进行步骤b的接种。

8.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中步骤c包括在既不包含抗坏血酸也不包含抗坏血酸盐的成纤维细胞培养介质M2¹存在的情况下第一培养步骤c’18至28小时和在包含抗坏血酸或其衍生物的成纤维细胞培养介质M2²存在的情况下第二培养步骤c”至少两天。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述抗坏血酸的衍生物为抗坏血酸盐。

10.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中步骤h.包括：

-在不包含透明质酸、透明质酸盐、抗坏血酸和抗坏血酸盐中任一种的培养介质M5¹存在的情况下第一培养步骤h.’6至24小时，

-在包含透明质酸或其衍生物的培养介质M5²存在的情况下第二培养步骤h.”至少2天，以及

-在包含透明质酸或其衍生物和抗坏血酸或其衍生物的介质M5³中第三培养步骤h.”’至少两天。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述抗坏血酸的衍生物为抗坏血酸盐，所述透明质酸的衍生物为透明质酸盐。

12.一种通过实施权利要求1至11中任一项中限定的方法可以得到的皮肤替代品。

13.一种由权利要求12所述的皮肤替代品组成的移植体。

14.根据权利要求13所述的移植体，用于作为用于治疗皮肤疾病和/或皮肤物质损失的装置而应用。

15.根据权利要求14所述的用于应用的移植体，其中所述皮肤疾病和/或皮肤物质损失选自包括烧伤、愈合缺陷、色素异常、血管瘤和皮肤癌的组。

16.根据权利要求14所述的用于应用的移植体，其中所述皮肤疾病和/或皮肤物质损失选自包括烧伤、慢性伤口、色素异常、血管瘤和皮肤癌的组。