[发明专利]微生物和其用于生产二酸的用途

权利要求书

1.不能降解脂肪酸的酵母菌株的用途，特别是解脂耶氏酵母菌株，其至少过表达以下基因：

-ALK3基因，其编码细胞色素P450单加氧酶，

-ADH2和ADH5基因中的至少一个，每个编码醇脱氢酶，和

-FALDH3和FALDH4基因中的至少一个，每个编码脂肪醛脱氢酶，或FAO1基因，其编码脂肪醇氧化酶，

用于从脂肪酸，特别是衍生自植物油的脂肪酸中发酵基制备至少一种二羧酸。

2.如权利要求1所述的用途，其中所述酵母菌株也过表达编码NADPH-细胞色素还原酶的CPR1基因。

3.如权利要求1或权利要求2所述的用途，其中所述酵母对于编码酰基辅酶A氧化酶同工酶POX1，POX2，POX3，POX4，POX5和POX6的基因也进行破坏。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的用途，其中所述酵母对于DGA1，DGA2和/或LRO1基因也进行破坏。

5.一种生产至少一种二羧酸的方法，包括以下步骤：

a)生长阶段，其中放置培养不能降解脂肪酸的酵母菌株，其至少过表达以下基因：

-ALK3基因，其编码细胞色素P450单加氧酶，

-ADH2和ADH5基因中的至少一个，每个编码醇脱氢酶，和

-FALDH3或FALDH4基因中的至少一个，其编码脂肪醛脱氢酶，或FAO1基因，其编码脂肪醇氧化酶

在基本上由包含至少一种碳源和一种氮源的能量底物组成的培养基中，

b)生物转化期，其中所述酵母菌株与至少一种脂肪酸或烃接触，优选在能量底物存在下。

6.如权利要求5所述的方法，还包括回收所形成的所述至少一种二羧酸的步骤。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其中所述脂肪酸为混合物的形式，特别是植物油或烷烃混合物形式，特别是油选自菜籽油，油酸菜籽油，向日葵油，油酸向日葵油，椰子油，棕榈油，棕榈仁油，橄榄油，花生油，大豆油，玉米油，芥子油，蓖麻油，棕榈油精，棕榈硬脂精，红花油，芝麻油，亚麻子油，榛子油，葡萄籽油，大麻油，或其提取物的副产物，或鱼油，或来自自酵母、细菌或微藻的油。

8.根据权利要求5至7中任一项所述的方法，其中所述酵母对于编码酰基辅酶A氧化酶同工酶POX1，POX2，POX3，POX4，POX5和POX6的基因也进行破坏。

9.根据权利要求5至8中任一项所述的方法，其中所述至少一种脂肪酸是脂肪酸的混合物，所述混合物按重量计，相对于混合物的总重量，油酸的含量超过30％。

10.一种组合物，其包含可以通过权利要求6至9中任一项所述的方法可获得的二羧酸的混合物。

11.一种组合物，包含：

-第一核酸分子，其对应于ALK3基因，编码细胞色素P450单加氧酶

-至少一种第二核酸分子，其对应于ADH2和ADH5基因中的至少一个，每个编码醇脱氢酶，和

-至少一种第三核酸分子，其对应于FALDH3或FALDH4基因的至少一个，编码脂肪醛脱氢酶，或对应于FAO1基因，其编码脂肪醇氧化酶，

所述第一核酸分子、第二核酸分子和第三核酸分子被结合或个体化。

12.如权利要求11所述的组合物，其中

-所述第一核酸分子对应于所述ALK3基因，所述第一核酸分子基本上包含或由序列SEQ ID NO：1组成，

-第二核酸分子对应于ADH2基因，并且基本上包含或由序列SEQ ID NO：5组成，或对应于ADH5基因组成，并且基本上包含或由序列SEQ ID NO：6组成，和

-第三核酸分子对应于FALDH3基因，并且基本上包含或由序列SEQ ID NO：7组成，或对应于FALDH4基因，并且基本上包含或由SEQ ID NO：8序列组成，或对应于FAO1基因，并且基本上包含或由序列SEQ ID NO：9组成，

任选地与对应于CPR1基因的第四核酸分子序列组合，第四核酸分子基本上包含或由序列SEQ ID NO：14组成。

13.由包含如权利要求11或12所定义的至少一种核酸分子的组合物转化的酵母菌株。

14.解脂耶氏酵母菌株，其选自以下菌株：

-Y3551菌株，其基因型MATA ura3-302leu2-270xpr2-322pox1-6Δdga1Δlro1Δdga2Δfad2ΔALK3-LEU2和表型[Leu+Ura-]，

-来自Y3551菌株的Y3950菌株，基因型MATA ura3-302leu2-270xpr2-322pox1-6Δdga1Δlro1Δdga2Δfad2ΔALK3-LEU2CPR1-URA3和表型[Leu+Ura+]，其2015年3月26日在CNCM(法国国家微生物培养保藏中心，法国巴黎15区棕红发医生街道25号巴斯德研究所，邮编75724)保藏，其保藏编号是CNCM I-4963，

-来自Y3950菌株的Y4428菌株，其基因型MATA ura3-302leu2-270xpr2-322pox1-6Δdga1Δlro1Δdga2Δfad2ΔALK3CPR1ADH2-URA3和表型[Leu-Ura-]，

-源自Y4428菌株的Y4457菌株，基因型MATA ura3-302 leu2-270 xpr2-322pox1-6 dga1Δlro1 dga2Δfad2ΔALK3 CPR1 ADH2-URA3和表型[Leu-Ura+]和

-Y4832，Y4833和Y4834菌株，于2016年3月14日在CNCM保藏，其各自保藏号分别是CNCM I-5072，CNCM I-5073和CNCM I-5074，这些菌株衍生自Y4457菌株，具有基因型MATA ura3-302 leu2-270 xpr2-322 pox1-6Δdga1Δlro1Δdga2Δfad2ΔALK3 CPR1 ADH2-URA3 FAO1-LEU2和表型[Leu+Ura+]。