[发明专利]含人血清白蛋白的神经干细胞增殖培养基

说明书

【技术领域】

本发明涉及含人血清白蛋白的神经干细胞和/或神经前体细胞增殖培养基、及使用所述培养基的神经干细胞和/或神经前体细胞增殖方法等。

【背景技术】

神经干细胞是有自身复制能，有多潜能性(multipotency)的未分化的细胞，有产生出神经系的多样的细胞(神经细胞及神经前体细胞(neural progenitor)、以及神经胶质细胞(星形胶质细胞、少突胶质细胞等)及神经胶质前体细胞等)的能力的细胞。神经干细胞及神经前体细胞因为可供给神经细胞等的通常在成体中难增殖的细胞，作为再生医疗中的生物体材料的提供源聚集了关注，被期待对于肌萎缩性侧索固化症、阿尔茨海默病、帕金森病等的难治性神经疾病或向神经损伤的治疗应用。在使用这样的神经干细胞和/或神经前体细胞的对于难治性神经疾病或神经损伤的治疗、以及这些治疗法的开发研究等中，由于以大量的神经干细胞和/或神经前体细胞作为必要，在体外的神经干细胞和/或神经前体细胞的培养方法的开发及改良是重要的课题之一。

作为神经干细胞和/或神经前体细胞的培养方法，至今报告了几种方法。

在非专利文献1中，作为神经干细胞的在体外的培养方法，记载了神经球(neurosphere)培养。在该文献中显示，通过在含上皮细胞生长因子(EGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的无血清培养基中对神经干细胞进行悬浮培养，能维持神经干细胞的未分化状态而保持多潜能性地使增殖。

另外，作为对神经干细胞和/或神经前体细胞进行粘附单层培养的方法，可举出在用层粘连蛋白、聚L鸟氨酸、纤连蛋白等的基质包被的培养器上，使用含EGF和/或bFGF的培养基而培养神经干细胞和/或神经前体细胞的方法等(非专利文献2)。

在上述的粘附单层培养中，报告了神经干细胞进行对称分裂，自身复制，有与神经球培养比较能提供均一的细胞集团的益处。

这些培养方法有可在体外培养神经干细胞及神经前体细胞的大的益处，有细胞的增殖慢、培养耗时间的缺点。从而，期望开发出用于维持神经干细胞或神经前体细胞的未分化性及多潜能性地促进增殖的改良的培养基及培养条件。

即便如此，对于含血清白蛋白的培养基至今有几处记载。在专利文献1中，作为将干细胞分化为内胚层前体细胞的培养基，公开了调节渗透压的培养基，记载了在添加人血清白蛋白的培养基中培养人工多能性干(iPS)细胞株，则促进内胚层分化诱导的效率。另外，在非专利文献3中，为了探讨糖化反应(Maillard反应)的最终糖化生成物(AGE)对于神经干细胞的分化的效果，使用含AGE修饰的牛血清白蛋白质的培养基而进行神经干细胞的培养。报告了在所述培养基中进行神经球培养，则促进向神经胶质细胞的一种星形胶质细胞的分化。再者，在非专利文献4中，为了渗透压维持以及生长因子及脂肪酸保持而对添加牛血清白蛋白的初代脑肿瘤细胞培养用培养基进行了记载。除了这些之外，由于牛血清白蛋白廉价且易得到，为了调制培养基中的渗透压，或为了使脂肪酸等的难溶性的化合物增溶，也添加到培养基中。

但是，对于人血清白蛋白对神经干细胞和/或神经前体细胞的未分化性及多潜能性的维持或增殖促进的影响则完全不知。

【现有技术文献】

【专利文献】

专利文献1：美国专利申请公开第20130224857号说明书

【非专利文献】

非专利文献1：Science,1992,255(5052)，1707-10。

非专利文献2：PLoS Biology,2005,3(9)，e283

非专利文献3：International Journal of Molecular Sciences,2014,15(1)，159-170

非专利文献4：BioTechniques,2013,55(2)，83,85-86,88

【发明内容】

【发明要解决的技术课题】

本发明的目的是提供维持神经干细胞和/或神经前体细胞的未分化性及多潜能性的状态下促进细胞增殖的培养基，另外，提供维持神经干细胞和/或神经前体细胞的未分化性及多潜能性的状态下促进细胞增殖的方法。

【解决课题的技术方案】

本发明人为达成上述目的而重复锐意研究的结果，发现人血清白蛋白发挥神经干细胞和/或神经前体细胞的未分化性及多潜能性的维持以及增殖促进的作用，从而完成本发明。

即，本发明如下。

[1]神经干细胞和/或神经前体细胞用培养基，其含人血清白蛋白。