[发明专利]微生物制剂的制造方法及微生物制剂

说明书

技术领域

本发明涉及微生物制剂的制造方法及微生物制剂。

背景技术

在废水处理中，作为将对象化合物从废水中去除的方法，使用燃烧处理方法或利用了对象化合物分解性微生物的生物学处理方法等。作为获得对象化合物分解性微生物的方法，已知对分解对象化合物的微生物进行富集培养、然后对该分解微生物进行鉴定、分离、进行纯培养的方法(分离培养方法)。另外，为如活性污泥这样的混合微生物体系时，已知将对象化合物以低浓度作为营养源供给、通过慢慢地提高浓度使活性污泥习惯对象化合物、从而提高分解能力的被称作驯化的方法(驯化方法)。

但是，分离培养方法中，分解微生物的分离需要很长时间，适合的微生物也只限于能够人工培养者，具有用于进行进一步纯培养的制造成本高的课题。另一方面，驯化方法虽然能够廉价且大量地培养分解微生物，但具有驯化需要很长时间的课题。

另外，作为将对象化合物分解微生物高密度化的方法，例如如专利文献1所记载的，公开了对硝化细菌进行高密度化、对具有优异物性的微粒个体和微生物进行凝聚造粒化的微生物制剂的制造方法。该微生物制剂由于通过连续培养也可高效地进行制造、保存，因此对于废水的高效处理是有用的。

现有技术文献

专利文献1：日本特开2003-274937号公报

发明内容

发明要解决的技术问题

但是，专利文献1所记载的方法虽然能够以氮处理能力为指标对硝化细菌进行高密度化，但造粒化中及造粒化后的硝化细菌群的种类、存在量是无法掌握的。在除氮以外的对象化合物的处理中，认为也是同样的。这样的方法中，仅以对象化合物的分解性为指标时，由于对象化合物分解性微生物的存在量及存在比例无法掌握，因而难以预测在造粒化工序中添加的对象化合物的浓度过高所导致的对象化合物分解微生物群的增殖抑制、或者因对象化合物的分解中间物的蓄积所导致的对象化合物分解微生物的增殖抑制等。另一方面，随着近年的基因分析技术的进步，能够在不对微生物进行分离的情况下，从活性污泥等复合微生物体系中掌握所存在的微生物的种类及存在量。但是，该技术的充分利用在现有情况下由于未脱离单纯的测定领域而受到局限，因而期待确立用于使基因分析技术应用于微生物制剂的制造方法的技术。

本发明鉴于上述事实，其目的在于提供通过监视对象化合物分解性微生物的存在比例，稳定且高效地制造以所期望的密度载持对象化合物分解性微生物的微生物制剂的方法。另外，本发明的目的还在于提供利用上述制造方法制造的微生物制剂、使用了该微生物制剂的化合物分解方法及该微生物制剂的评价方法。

用于解决技术问题的手段

本发明者们通过根据对制造中的微生物制剂所载持的微生物包罗性地进行分析的基因分析信息、对微生物制剂所载持的对象化合物分解性微生物进行监视，从而新确立了有效地制造微生物制剂的方法，进而完成了本发明。

即，本发明例如涉及以下的[1]～[6]。

[1]一种载持对象化合物分解性微生物的微生物制剂的制造方法，其具备：

在含有对象化合物的培养基中添加含有对象化合物分解性微生物的生物质和无机微粒载体，使生物质所含的微生物载持在无机微粒上，一边监视载持于无机微粒载体的微生物中的对象化合物分解性微生物的存在比例(丰度比例，abundance ratio)、一边进行培养的工序；和

在对象化合物分解性微生物的存在比例达到预定值之后，对载持有对象化合物分解性微生物的无机微粒载体进行回收，获得微生物制剂的工序；

其中，对象化合物分解性微生物的存在比例通过包含以下工序的方法获得：

对载持于无机微粒载体的微生物的16S rRNA基因的预定区域进行扩增，获得扩增产物的工序；和

对扩增产物的碱基序列数据进行分析，根据各碱基序列数据间的同源性将所得碱基序列数据分为多个组，将具有各个组的碱基序列数据的微生物作为单一的种类，根据各个组的代表碱基序列数据确定对象化合物分解性微生物的种类，并根据所得碱基序列数据的数量计算全部微生物中的对象化合物分解性微生物的存在比例的工序。

[2]上述[1]所述的制造方法，其中，对象化合物为(S)-2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酸。

[3]上述[1]所述的制造方法，其中，对象化合物为氨。

[4]一种微生物制剂，其是通过上述[1]～[3]中任一项所述的制造方法制造的。

[5]一种化合物分解方法，其使用了上述[4]所述的微生物制剂。