[发明专利]抗前‑BCR拮抗剂和方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2015年2月5日提交的美国临时专利申请系列号62/112,339的优先权，其通过引用并入本文。

序列表

本申请包含作为ASCII文本文件，通过EFS-Web电子方式提交给美国专利和商标局的序列表，其标题为“2016-02-05-SequenceListing_ST25.txt”，大小为4KB，于2016年2月5日创建。由于序列表的电子提交，电子提交的序列表同时用作37 CFR§1.821(c)所要求的纸质副本和§1.821(e)所要求的CRF。序列表中包含的信息通过引用并入本文。

发明内容

在一个方面，本公开描述了包含针对前-B细胞受体(前-BCR)的拮抗剂的组合物。

在一些实施方案中，拮抗剂可以衍生自特异性结合前-BCR的替代轻组分(VpreB，λ5)的抗体。

在一些实施方案中，抗体可以包括单价抗体片段，例如scFv或Fab-Fc。在一些实施方案中，抗体可以是重组的，和/或经工程化以递送毒素有效载荷。在一些实施方案中，抗体可以被人源化。在一些实施方案中，抗体可以包括抗VpreB抗体，例如抗VpreB1抗体。

在一些实施方案中，针对前-BCR的拮抗剂可以包括被工程化以作为T细胞嵌合受体表达的抗体片段。

在一些实施方案中，针对前-BCR的拮抗剂可以包括阻断前-BCR与半乳凝素结合的肽或抗体衍生物，无论是溶解的还是存在于基质细胞的背景中。

在另一方面，本公开描述了一种药物组合物，其包含上面概述的组合物的任何实施方案和药学上可接受的载体。

在另一方面，本公开描述了一种治疗B细胞前体急性成淋巴细胞性白血病(BCP-ALL)的方法。通常，该方法包括以有效改善BCP-ALL的至少一种症状或临床病征的量向具有BCP-ALL的受试者施用上面概述的药物组合物的任何实施方案。

在另一方面，本公开描述了包括上面概述的组合物的任何实施方案的药剂盒。

本发明的上述概述不旨在描述本发明的每个公开的实施方案或每个实施。下面的描述更具体地举例说明了说明性的实施方案。在整个申请的几个地方，通过实例列表提供了指导，这些实例可以以各种组合使用。在每种情况下，所列举的列表仅用作一个代表性的组，并且不应被解释为排他列表。

附图简述

图1. 前-BCR及其早期信号传导配偶体Lyn和Syk。

图2. A)使用Fab缀合的量子点(QD655，QD585)进行前-BCR寡聚动力学的2-色跟踪。B)使用FPLC大小排阻色谱法(Superdex 75 10/300)从二价片段(级分B)分离α-Igβ Fab(级分C)。C)考马斯染色凝胶，表明来自FPLC的级分C中的Fab的产率。D)通过蛋白质印迹用链霉抗生物素蛋白-HRP检测的生物素化Fab片段的纯化。

图3. A)使用MODELLER算法构建了几种不同的基于生物抗体或肽同源性模型。基于离散优化蛋白质能量(DOPE)得分选择最佳候选者。B)基于由前-BCR X射线结构(pdb代码：2H32)构建的模型，将同源性模型蛋白质对接(即ZDock算法)到推定的前-BCR。C)同样，同源性建模和分子对接提供了对破坏前-BCR/半乳凝素-1相互作用(pdb代码：2LKQ)的拮抗剂的洞察。D)使用GROMOS或AMBER力场，将构建的模型放置在填充有显性溶剂并经受能量最小化、NVT/NPT系综和生产MD(即受控分子动力学，伞形采样)的模拟箱中，以在不同设计的前-BCR调节剂之间比较自由能结合。

图4. 使用与工程化替代物或λ5轻链变体配对的IgG重链测试VpreB结合特异性。

图5. A)显示抗VpreB1 Fab结合至活的前-B ALL细胞(697细胞系)的数据。B)完整的抗VpreB IgG的内在化是缓慢和剂量依赖的。C)显示完整的Alexa 647缀合的VpreB IgG与活细胞的亚纳摩尔结合的数据。

图6. 显示白血病细胞的抗-VpreB1 IgG调理作用支持体外人NK细胞杀伤(ADCC)，并且是剂量依赖性的数据。A)BCP-ALL细胞的NK介导的杀伤(来自Promega的Cytotox 96®非放射性细胞毒性测定)。B)BCP-ALL细胞的NK介导的杀伤(细胞成活力的7AAD流动测定)。

图7. 治疗性抗体及其衍生物的临床前研究在BCP-ALL的异种移植模型中进行。