[发明专利]通过对选择性剪接进行适体介导的调节来实现的基因表达调控

权利要求书

1.一种用于调控靶基因的表达的多核苷酸盒，所述多核苷酸盒包含：

a.核糖开关；

b.选择性剪接的外显子，所述选择性剪接的外显子侧接5′内含子和3′内含子，

其中所述核糖开关包含(i)效应区，所述效应区包含茎部，所述茎部包括所述3′内含子的5′剪接位点序列，其中所述效应区茎部的长度为7至20个碱基对；以及(ii)适体，

其中所述选择性剪接的外显子包含终止密码子，所述终止密码子在所述选择性剪接的外显子被剪接至所述靶基因mRNA中时与所述靶基因同框。

2.如权利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述适体结合小分子配体。

3.如权利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述5′和3′内含子衍生自来自所述靶基因的内源性内含子。

4.如权利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述5′和3′内含子对所述靶基因来说为外源性的。

5.如权利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述5′和3′内含子衍生自人类β-球蛋白基因的内含子2。

6.如权利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述5′内含子包含与所述靶基因同框的终止密码子。

7.如权利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述5′和3′内含子的长度各自独立地为50至300个核苷酸。

8.如权利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述5′和3′内含子的长度各自独立地为125至240个核苷酸。

9.如权利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述效应区茎部的长度为8至11个碱基对。

10.如权利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述选择性剪接的外显子衍生自由以下组成的组：人类二氢叶酸还原酶基因的外显子2、突变体人类维尔姆斯瘤1外显子5、小鼠钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IIδ外显子16或SIRT1外显子6。

11.如权利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述选择性剪接的外显子为来自SEQ ID NO:15的人类DHFR的已修饰外显子2。

12.如权利要求1所述的多核苷酸盒，其中所述选择性剪接的外显子为合成的。

13.如权利要求1所述的多核苷酸盒，其中已通过由以下组成的组中的一项或多项对所述选择性剪接的外显子进行了修饰：改变外显子剪接增强子的序列、改变外显子剪接沉默子的序列、添加外显子剪接增强子以及添加外显子剪接沉默子。

14.权利要求1至13任一项所述的多核苷酸盒在制备用于通过如下方法调节靶基因的表达的药物中的用途，所述方法包括：

a.将所述的多核苷酸盒插入靶基因中，

b.将包含所述多核苷酸盒的所述靶基因引入细胞中，以及

c.使所述细胞暴露于小分子配体，所述小分子配体以有效诱导所述靶基因的表达的量特异性结合所述适体。

15.如权利要求14所述的用途，其中将所述多核苷酸盒插入所述靶基因的蛋白质编码区中。

16.如权利要求14所述的用途，其中当所述小分子配体存在时所述靶基因的所述表达比所述小分子配体不存在时的表达水平高5倍以上。

17.如权利要求14所述的用途，其中当所述小分子配体存在时所述靶基因的所述表达比所述小分子配体不存在时的表达水平高10倍以上。

18.如权利要求14所述的用途，其中将两个或更多个所述多核苷酸盒插入所述靶基因中。