[发明专利]用于刺激细胞增殖和提供FGF2同种型的生物活性混合物的方法和组合物

说明书

本文公开了用于提供具有生物活性的FGF2同种型的混合物的方法和组合物。生物活性包括但不限于刺激神经前体细胞的增殖，刺激内皮细胞的增殖，刺激神经前体细胞的发育和刺激星形胶质细胞的发育。

相关申请的交叉引用

本申请根据35 U.S.C.§119(e)要求美国临时专利申请号 62/178,190(2015年4月1日提交)和美国临时专利申请号62/204,776 (2015年8月13日提交)的权益；为了所有目的，其公开内容通过引用整体并入本文。

关于联邦政府支持的声明

不适用。

领域

本发明涉及生长因子及其对细胞特别是神经细胞和与神经系统相关的细胞的增殖和发育的影响的领域。

背景

间充质细胞植入

间充质基质细胞(MSC)及其衍生物的植入正在被作为中枢神经系统(CNS)的各种退行性疾病的治疗进行开发。认为MSC植入CNS 导致的治疗效果主要是由于来自活的植入细胞的可溶性因子的分泌，所述可溶性因子提供组织保护、再生和免疫调节刺激[1-3]。然而，矛盾的是，植入后CNS中MSC的移植率较低[4,5]；并且已经观察到治疗益处在移植细胞不能被检测到之后持续很长时间。已经提出了各种解释来解释植入的MSC的不良移植。一些研究者提出触发先天和随后的适应性免疫应答来解释移植物损失；然而，其他人发现与HLA匹配状态无关的相似移植细胞丢失率[6,7]。另外的研究提供了证据，显示同种异体MSC在植入后不会引起显著的免疫反应(在[8]中综述)。还已经报道，植入成人脑中的细胞内标记的MSC(活的或死的) 可以将标签转移到受者的周围和远处的细胞，并且标签可以掺入受者的细胞[9,10]。

FGF-2

FGF2(也称为碱性成纤维细胞生长因子或bFGF)是干细胞的主要生长因子，血管生成的强力诱导剂，必需的伤口愈合介导因子，和神经系统发育和再生的主要参与者(在[11]中综述)。通过可变翻译起始从独特的FGF2 mRNA翻译5个FGF2同种型：18kD低分子量 (LMW)同种型；和分子量为22、22.5、24和34kD的高分子量(HMW) 同种型。LMW FGF2主要是细胞质的并且是分泌性的，而HMW同种型主要是细胞核的，然而在某些条件下可以在细胞核、细胞质或细胞外基质中发现任何一种异构体。所有同种型缺乏引导通过内质网- 高尔基体途径分泌的信号肽。早期研究表明，机械损伤的内皮细胞单层释放高水平的FGF2[12,13]。基于这些研究和分泌信号肽的缺乏，细胞死亡或甚至亚致死性损伤已被描述为FGF2释放的主要机制[14]。因此，FGF2已经被提名为“用于快速引发组织完整性和/或损伤后修复的常规维持所需的细胞生长的伤口激素”[15]。

虽然许多报告记录了MSC的FGF2 mRNA的表达，并证明细胞内FGF2蛋白的存在[11,12,16]，但由于分泌的FGF2的浓度非常低，很少有报道提供FGF2分泌的测量[17,18]。也许是因为这个原因， FGF2并不被认为是介导植入MSC对周围的神经组织的再生作用的主要候选者。

DNTT-MSC

DNTT-MSC(“NICD瞬时转染的MSC的后代”)是可以通过用编码Notch细胞内结构域(NICD)(例如人Notch1细胞内结构域 (NICD1))的载体瞬时转染MSC和随后进行选择和随后的扩增而从人骨髓MSC衍生的细胞群。与亲代MSC相比，该过程产生在体外表现出优异的血管生成和神经生长(即，神经前体细胞的生长和分化) 性质的细胞群体[19-21]。DNTT-MSC的神经发生作用归因于FGF1， FGF2和BMP的增加的表达和从而增加的分泌[19,22]。