[发明专利]培养细胞的细胞间分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种培养细胞的细胞间分离方法，更详细而言，涉及利用水流对于通过培养而获得的细胞进行细胞间分离的方法。

背景技术

动物细胞在培养时有时因桥粒那样的细胞间的结合而彼此牢固结合。细胞间的结合以从细胞质生长如伪足那样的突起而与其他细胞的突起结合的方式开始并且结合强度逐渐增加。

用于分离这样彼此结合的细胞的现有方法如下。

首先有如下方法：使用胰蛋白酶(trypsin)那样的蛋白质溶解剂将所述细胞质突起去除的方法。但是该方法由于细胞毒性大而存在连细胞表面特性也被消除的缺点。

其次有如下方法：置于水的湍流中并利用水的剪切力分离的方法。但是，为了利用单纯的水的剪切力使10μm程度的细胞在不同方向的惯性质量相同，该方法需要对水的湍流赋予最大化的多样性或者在高流速的状态下诱发摩擦。此外还存在如下问题：分层的水流的分界需要以10μm单位的微流体(micro fluid)构成，因此不仅难以实现而且在流速之差不大时需要反复多次。由此存在细胞被破坏的概率高并且分离率极低的问题。

此外，为了分离细胞，还有利用水流的方法。

图2和图3示出采用以往的利用水流的方法来分离细胞的示意图。

以往的利用水流的方法之一是，在中心高速移动区间细胞成团移动，在阻力面产生因速度差异引起的相同方向分离(参照图2)。

以快的流速通过的其他方式中，由于不存在用于细微地分开水流的构件而仅仅依赖于在所通过的管的内壁被诱发的阻力，因此流速快的中心穿流中不发生任何细胞分离现象，即使存在这样的问题，也只是反复多次而想要克服该问题，并且在细胞群通过时，置于细胞之间的阻力体有效切断细胞间的连接，但从在细胞群外部利用彼此不同的阻力的方面考虑是低效率的。

以往的利用水流的方法之二是，在如水槽那样的圆筒形容器中形成湍流的方法(参照图3)。

在水槽的壁侧形成稳定的层流而细胞仅进行旋转，无法显著减小细胞之间的速度差异，从而存在效率低的问题。在湍流侧分离的细胞会受到不必要的力或者难以以均等的概率使细胞接触。此外，存在湍流应用次数的偏差大的问题。在旋转水流中多种阻力体旋转的情况下，虽然从诱发有意的阻力方面考虑是更高效的，但从没有均一应用试样的处理概率的单方向水流的方面考虑，存在难以使对每个细胞的处理概率均一化的问题。

为了将液态试样适当粉碎或混合，需要在仅使试样的一部分通过诸如均质混合机(homo-mixer)、管路混合器(line mixer)等的同时进行处理，并以使一次处理后的试样聚集于处理装置另一侧的方式，使处理前试样和处理后试样位于隔开的空间。

如上所述，在分离培养的细胞培养的细胞时，需要使受到的外部阻力降到最低限度，使细胞损伤降到最低限度。

发明内容

技术课题

为了解决上述问题，本发明的目的在于，提供在将细胞的损伤降到最低限度的同时分离培养的细胞的方法。

本发明的另一目的在于，在分离干细胞时提供既简单又能够在将因外部冲击而细胞受到的损伤降到最低限度的同时分离细胞的方法。

解决课题手段

为了实现上述目的，本发明提供培养细胞的细胞间分离方法，其是在培养状态下将培养的细胞分离的方法，其特征在于，提供第一容纳空间、第一容纳空间的液体中多个细胞以彼此连接的状态存在的细胞悬浮液、与所述第一容纳空间密闭连接且安装有具备1个以上平均直径为5μm～300μm的贯通孔的细胞分开构件的过滤器容器、以及与所述过滤器容器密闭连接的第二容纳空间，通过使所述细胞悬浮液从第一容纳空间经由过滤器向第二容纳空间移动，可在与过滤器的固定阻力部碰撞的同时使细胞间的连接被动且机械地分离。

此外，本发明提供培养细胞的细胞间分离方法，为了进行多次通过所述细胞分开构件的过程，包括1次以上从第二容纳空间重新移动至第一容纳空间的过程。

本发明提供培养细胞的细胞间分离方法，其特征在于，为了进行多次通过所述细胞分开构件的过程，在所述过滤器容器内形成有多个细胞分开构件。

本发明提供培养细胞的细胞间分离方法，其特征在于，为了进行多次通过所述细胞分开构件的过程，追加第二过滤器容器，并且形成有密闭连接于所述第二过滤器容器的第三容纳空间。

本发明提供培养细胞的细胞间分离方法，其特征在于，所述细胞分开构件使用织造的网状、冲孔板状、多叶片(暖气片、鳃)状的一种以上形状。