[发明专利]用于治疗癌症的对人抗原R表达的siRNA抑制

说明书

本发明提供了与靶向部分和抑制人抗原R(HuR)的表达的siRNA两者连接的DNA树枝状聚合物、包含所述DNA树枝状聚合物的药物组合物以及采用所述DNA树枝状聚合物的治疗方法和用途。还公开了可用的siRNA序列。

技术领域

本发明的原理和实施方案总体上涉及针对siRNA的旨在抑制人抗原R(HuR或ELAVL1)表达的靶向性DNA树枝状聚合物递送和可用于抑制HuR表达的组合物。

对序列表的交叉引用

2016年4月11日创建并且命名为“DSC0058-00WO_ST25.txt”(2KB)的序列表以引用的方式合并在本文中。

背景

人抗原R(又称为HuR或ELAVL1)是转录后调控RNA结合蛋白，其调控多个参与肿瘤细胞存活和抗药性的基因的表达。mRNA稳定性蛋白由所述ELAV1基因编码。它在卵巢癌中大量存在并且功能亢进，而且还高度表达于乳腺癌、肺癌、间皮瘤和结肠癌中。

某些肿瘤细胞在其表面上表达升高水平的叶酸(叶酸盐)受体。这允许在全身施用后将治疗剂特异性递送至此类肿瘤，因为叶酸盐-药物缀合物结合叶酸盐受体并且通过胞吞作用触发细胞吸收。表达升高水平的叶酸盐受体的肿瘤有卵巢癌、间皮瘤、乳腺癌、结肠癌和肺癌。

DNA树枝状聚合物是由部分双链DNA单体亚单元构建的高度分支化分子，各亚单元包含两个单链DNA分子，该两个单链DNA分子共用位于各股链中心部分中的序列互补性区域但在5'端和3'端不互补。所述单体的单链端形成了四个“臂”，所述臂可用于与另一个单体上的互补臂序列杂交。因此，通过不同的互补单链臂的杂交而构造了呈层状的DNA树枝状聚合物。可用未杂交臂可以用来附接负荷，诸如靶向部分、治疗实体或可检测标记。

已经使用DNA树枝状聚合物将多种负荷分子靶向性递送至细胞，包括诊断性负荷和治疗性负荷。利用生物活性剂和靶向部分的组合对DNA树枝状聚合物进行衍生化的能力允许在全身施用后将功能保持材料递送至特定细胞类型。RNA干扰(RNAi)是由于双链RNA(dsRNA)定点生成之故，通过选择性地使靶标基因的相应mRNA失活而有效地使其表达沉默的过程。可以与DNA树枝状聚合物连接的生物活性分子是通过使诸如siRNA(小干扰RNA)等RNA降解的细胞过程来促进dsRNA诱导的基因沉默的RNA。siRNA的基因沉默机制是使靶标mRNA降解，由此减少所翻译的蛋白质的量。siRNA是通常为21至23个核苷酸长的双链RNA，其激活RNAi并且取决于与靶标mRNA的互补结合，以序列特异性方式导致mRNA降解。

持续需要治疗癌症的改良型组合物和方法，包括改进有效治疗剂对癌细胞的靶向性递送。本发明针对这些需要。

概要

本发明的一个方面是有关于包含DNA树枝状聚合物的组合物，所述DNA树枝状聚合物与抑制癌细胞表达癌症相关mRNA的siRNA和特异性结合所述癌细胞上的细胞表面受体或细胞表面蛋白的部分(“靶向部分”)两者连接，所述细胞表面受体或细胞表面蛋白在与所述靶向部分结合后被所述细胞内在化。在某些实施方案中，所述靶向部分可以特异性结合相较于非癌细胞而言在癌细胞上被过度表达的细胞表面受体或细胞表面蛋白。

在所述组合物的第一个实施方案中，与所述DNA树枝状聚合物连接的siRNA可以是抑制HuR表达的siRNA。此类siRNA的具体非限制性实例包括以下具有3'悬臂的双链siRNA：

小鼠(m)HuR siRNA-

5'-GCCUGUUCAGCAGCAUUGGdTdT-3'(SEQ ID NO:1)

3'-dTdTCGGACAAGUCGUCGUAACC-5'(SEQ ID NO:3)

和

人(h)HuR siRNA-