[发明专利]表达人特定分子和人Fcγ受体家族的转基因非人动物

说明书

本发明的目的在于提供一种能够适于针对人特定分子的分子靶向物质或靶向药物的特性、药理作用及安全性进行评价的转基因非人动物，以及该转基因非人动物的制作方法。本发明的转基因非人动物被导入有编码人特定分子的基因和编码人Fcγ受体家族的基因，并且表达编码该人特定分子的基因和表达编码该人Fcγ受体家族的基因。

技术领域

本发明涉及一种表达人的受体、调节因子、抗原等人特定分子与人Fcγ受体家族的转基因非人动物，以及使用该转基因非人动物，在体内利用实验动物(小鼠、大鼠、兔等)对与人特定分子结合的分子靶向物质(例如人嵌合抗体、人源化抗体等)的特性、安全性和治疗效果进行评价的方法。

背景技术

近年来，基因工程技术和抗体工程技术取得了辉煌的进步，即能够制造出以抗体药物为代表的针对人分子的靶向药物。但是，当要利用非临床的动物实验针对人分子的靶向药物的药理作用和安全性进行评价时，即使向不具有作为靶向分子的人抗原的非人动物(例如小鼠、大鼠、兔等)给予以人分子为靶的抗体等分子靶向药物，也不会产生与给予的分子靶向药物反应的人抗原，故无法进行适当的评价。因此，在开发人嵌合抗体及人源化抗体等分子靶向药物时，需要一种事先通过体内动物实验来评价其安全性和治疗效果的方法(非临床试验的方法)。

在人类基因组的破译业已完成的今天，成为抗原的人分子的基因组信息及基因组片段等生物资源能够很容易地得到，针对作为分子靶向药物的代表的抗体药物，正以数百的数量级进行着开发，展开着激烈的竞争。作为现有的抗体药物原料的单克隆抗体，其对抗原(靶向分子)的特异性高，生物体内的稳定性也高，毒性低，生产方法也具有通用性并较为容易。另外，一旦获得特异性和结合活性优异的抗体，便可进行各种修饰增强活性。但是，由于其临床效果未必充足，给予量也较多，因此会产生需要高昂的药剂费用的问题。关于其原因，列举有：没有能够在体内针对人的抗原的抗体功能进行评价的适合的动物模型，无法通过使用疾病模型的非临床试验来评价药剂。为了解决这种问题，需要使用适合的动物模型进行评价的方法，而在该方法中，必须制作用于在体内评价以抗体为代表的分子靶向药物的功能的动物模型。

在日本厚生劳动省药品食品局下发的关于“生物技术应用药物的非临床安全性评价”(2012年3月23日日本药食审查发0323第1号)(非专利文献1)的第1部3.非临床安全性实验3.3动物种类/模型的选择中，记载有“用于单克隆抗体实验的适合的动物种类是能表达所预期的抗原表位并能显示其与人体组织具有类似的组织交叉反应性的动物种类”，以及“如果无适合的动物种类，则应考虑使用表达人源受体的转基因动物或使用对该动物而言相同的蛋白等”，体现出利用转基因动物的想法。此外，还记述有“使用表达人源受体的转基因动物模型而获得的信息是最有效的”。另一方面，虽然也体现出利用使用猕猴等非人灵长类的评价方法的想法，因其具有与上述后者的人抗原类似的相同蛋白(抗原同源)，但使用非人灵长类的试验从伦理和/或动物保护的观点来看，不仅动物实验受到非常严格的限制，而且成本非常高昂，不易采用。所以，需要使用不同的转基因动物的评价方法。

因此，报道有很多为了用于抗体医药开发，制作通过小鼠表达单克隆抗体识别的人的抗原及受体等的转基因小鼠。另一方面，当利用小型的质粒型的表达载体进行基因导入时，导入基因的预期表达量及导入基因的原本的精密表达调控难以在制作的转基因小鼠中得到重现。因此，报道有将同时包含编码人抗原及人受体等的基因和该基因的表达调控序列的来源于人类基因组的巨大DNA片段用作表达载体(BAC表达载体)导入受精卵而制作的转基因小鼠等，通过该方法制作表达人CD20的转基因小鼠(专利文献1、非专利文献2)。这种转基因小鼠在血液、骨髓、脾脏、淋巴结和派尔集合淋巴结的成熟细胞、前B细胞和未成熟细胞内表达CD20，人CD20在这些细胞内的表达水平为CD20在人细胞内的表达水平的约40％(专利文献1)。另外，人CD20B在转基因小鼠的脾脏及B细胞内的表达水平与在人体内的表达水平相比要低1～7倍(非专利文献2)。此外，作为重现人免疫系统的非人动物，报道有改变基因组以共同表达人CD16与其辅助分子的敲入小鼠(专利文献2)。报道有使用如此制作的表达人抗原的转基因小鼠，即使在体内，针对人抗原的抗体也会显示药理活性(非专利文献2、非专利文献3)。