[发明专利]载体制剂

说明书

相关专利申请的交叉引用

本申请根据35 U.S.C.§119(e)要求2015年3月20日提交的美国临时专利申请第62/136,309号的优先权，所述临时专利申请的全部内容通过引用整体并入本文。

序列表说明

本申请相关的序列表以文本格式提供以代替纸质副本，并以引用方式将其并入说明书中。包含序列表的文本发明件的名称为BLBD_025_01WO_ST25.txt。文本发明件的大小是3KB，于2016年3月18日创建，并以EFS-Web电子版与说明书一起提交。

技术领域

本发明一般涉及用于稳定病毒载体的组合物和制剂。特别地，本发明涉及用于长期储存和稳定病毒载体以在体外和体内施用的包含海藻糖或其衍生物的组合物。

背景技术

针对一些疾病的基因疗法最近取得了成功。由于逆转录病毒能稳定地整合到宿主细胞基因组中，所以使用逆转录病毒将基因递送到哺乳动物细胞得到推广。在基因疗法中已经使用了许多逆转录病毒载体，包括γ逆转录病毒和慢病毒。

慢病毒是复杂的逆转录病毒，其基于更高的复杂性，在潜伏感染的过程中可以整合到非增殖细胞的基因组中并调节其生命周期。这些病毒包括HIV-1、HIV-2和SIV等。像其他逆转录病毒一样，慢病毒具有侧面与两个长末端重复(LTR)序列相接的gag、pol和env基因。这些基因中的每一个基因编码多种蛋白质，最初表达为一种前体多蛋白。这些蛋白对于病毒的结构及其RNA基因组的复制十分重要。5′和3′LTR用于促进病毒粒子RNA的转录和多聚腺苷酸化。

慢病毒的转导可能性和潜力受到载体生产和储存过程中生长培养基和血清成分中的各种因素的影响，包括温度、pH、冻融频率和培养条件。在较高的温度下储存时，可以观察到慢病毒滴度随着冻融周期的增加而呈双相性降低(见Kigashikawa和Chang，《病毒学(Virology)》，第280期，第124-131页；2001)。为了使基因疗法的效果最大化，需要具有维持其效力的逆转录病毒载体。

发明内容

本领域需要一种稳定的水性组合物，其包含在较宽的温度范围下储存不同时间段时保持异源序列的感染滴度和/或表达并进一步适用于体外或体内施用的病毒载体，例如慢病毒载体。

本发明一般提供用于保存病毒载体的组合物和制剂。实施方案提供海藻糖或其衍生物的水性组合物作为长期储存病毒载体的合适的保护剂。与未储存于海藻糖或其衍生物中的病毒载体相比，储存于含有特定浓度海藻糖的溶液中的病毒载体在从约-80℃至约20℃的较宽温度范围内经过多个冻融周期和大范围时间段仍能保持异源序列的感染滴度和/或表达。

因此，在某些实施方案中，提供包含：(a)病毒载体；(b)按重量计约3％-15％的海藻糖或其衍生物；和(c)药学上可接受的稀释剂的水性组合物。在一个实施方案中，病毒载体是腺病毒载体。在另一个实施方案中，病毒载体是腺相关病毒载体。在另一个实施方案中，病毒载体是逆转录病毒载体。

在一个实施方案中，病毒载体是慢病毒载体。在另一个实施方案中，慢病毒载体选自基本上由人免疫缺陷病毒(HIV)、维斯纳梅迪病毒(VMV)、山羊关节炎脑炎病毒(CAEV)、马传染性贫血病毒(EIAV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)、牛免疫缺陷病毒(BIV)和猴免疫缺陷病毒(SIV)所组成的群组。在另一个实施方案中，慢病毒载体是HIV-2。

在一个实施方案中，病毒载体包括病毒的包膜多肽，所述病毒选自由禽白血病病毒(ALV)、FIV、HIV、水疱性口炎病毒(VSV)、莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)、长臂猿白血病病毒(GaLV)、绵羊肺腺瘤反转录病毒(JSRV)、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、人类嗜T淋巴球病毒1(HTLV-1)、维斯纳梅迪病毒(VMV)、SARS-CoV、金迪普拉病毒、马尔堡病毒、莫科拉病毒、猫内源性逆转录病毒(RD114)、埃博拉病毒、狂犬病病毒、罗斯河病毒(RRV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人副流感病毒3型、丙型肝炎病毒(HCV)、仙台病毒、辛德毕斯病毒、塞姆利基森林病毒(SFV)、鸡瘟病毒(FPV)、流感病毒、委内瑞拉马脑炎病毒和拉各斯蝙蝠病毒所组成的群组。在具体的实施方案中，病毒载体包括源自VSV或RD114的包膜多肽。

在一个实施方案中，病毒载体包括编码嵌合抗原受体(CAR)多肽、工程T细胞受体多肽或双特异性T细胞接合子多肽的多核苷酸序列。