[发明专利]用于制造神经干细胞的方法及其用途

权利要求书

1.一种用于制备诱导的神经干细胞的方法，其包括：

提供体细胞；

用编码Sox2的核酸转染或转导所述体细胞，借此所述体细胞表达Sox2；和然后

转分化所述体细胞，其中通过在神经祖细胞培养基中生长所述体细胞进行所述转分化，

以由此制备所述诱导的神经干细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述转分化进行1至10天的时间。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述转分化进行1至5天的时间。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述转分化进行1至3天的时间。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述体细胞是成纤维细胞。

6.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述体细胞是皮肤成纤维细胞。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述诱导的神经干细胞表达巢蛋白和/或不表达Nanog或OCT3/4。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述诱导的神经干细胞能够分化成神经/星形细胞。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述方法包括用包含所述编码Sox2的核酸的慢病毒载体转导所述体细胞。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中不使用饲养细胞进行所述转分化。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述神经祖细胞培养基包含选自以下的一种或更多种成分：DMEM/F12、N2补充物、胰岛素、神经基础培养基、B27补充物、非必需氨基酸、bME、L-谷氨酰胺、Glutamax、SB431542、LDN193189、视黄酸、BSA、CHIR99021、转铁蛋白、亚硒酸钠、和cAMP。

12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括使用编码TERT (例如，hTERT)的核酸转染或转导所述体细胞。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括使用治疗剂和/或报道分子装载所述诱导的神经干细胞。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述装载包括使用能够产生治疗剂的核酸转染或转导所述诱导的神经干细胞，并且其中所述治疗剂是蛋白毒素、溶瘤病毒、促凋亡剂或可用于酶/前药疗法的酶。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述能够产生治疗剂的核酸和所述编码Sox2的核酸在同一载体上提供。

16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括扩展所述诱导的神经干细胞以形成诱导的神经干细胞的群体。

17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括将所述诱导的神经干细胞封装于水凝胶中或将所述诱导的神经干细胞接种在支架上。

18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括将所述诱导的神经干细胞施用于有需要的受试者。

19.如权利要求18所述的方法，其中所述诱导的神经干细胞相对于所述受试者是同种异体、同源或自体的。

20.如权利要求18或权利要求19所述的方法，其中所述受试者是人受试者。

21.如权利要求18-20中任一项所述的方法，其中所述受试者需要治疗脑癌。

22.如权利要求21所述的方法，其中所述脑癌是成胶质细胞瘤。

23.如权利要求21或权利要求22所述的方法，其中所述施用在手术去除至少一部分的脑肿瘤之后通过腔内施用进行。

24.根据权利要求18-23中任一项所述的方法，其中所述诱导的神经干细胞相对于所述受试者是自体的并且其中在所述提供所述体细胞之后进行1至14或21天的所述施用。