[发明专利]组合密螺旋体和非密螺旋体梅毒测试

说明书

本文提供了用于检测指示个体中梅毒感染的存在和阶段的抗体的多重试验。感染梅毒的个体产生针对梅毒组分的抗体和与感染相关的脂质细胞碎片。本申请是这些不同抗体靶标在单一试验中的首次组合。

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年3月10日提交的美国临时专利申请62/131,062和2015年6月18日提交的美国临时专利申请62/181,685的优先权，其各自通过引用将其全部内容纳入本文。

背景技术

梅毒是通过螺旋细菌苍白密螺旋体(Treponema pallidum)引起的性传播疾病。梅毒的血清学测试可被分成两类，非密螺旋体和密螺旋体测试。非密螺旋体测试检测针对从破坏的宿主细胞中释放的类脂物质的非密螺旋体抗体(反应素)。最广泛使用的非密螺旋体测试是性病研究实验室(VDRL)和快速血浆反应素(RPR)测试，其是采用基于心磷脂-卵磷脂-胆固醇的抗原的测试(通常是絮凝测试)。非密螺旋体测试具有广泛可用、廉价和方便实施的优点。这些测试的结果通常在成功治疗后恢复为阴性，因此它们可用于监测针对治疗的响应。然而，这些测试一般需要主观解释，因此它们难以解释，尤其针对弱反应性血清。非密螺旋体测试也具有有限的高体积测试和自动化的潜力。相反，密螺旋体测试检测针对苍白密螺旋体的天然或重组表面抗原，如15kDa、17kDa、和47kDa蛋白的抗体。密螺旋体测试包括苍白密螺旋体被动颗粒凝集(TP-PA)试验，荧光密螺旋体抗体吸附(FTA-ABS)测试，和大多数酶免疫测定(EIA)测试。与非密螺旋体测试相比，密螺旋体测试显示出较高的特异度和灵敏度。然而，它们不能用于监测对治疗的响应，因为密螺旋体抗体在感染后的数年内仍然存在。

使用常规算法(患者试样由非密螺旋体测试筛选，之后进行密螺旋体测试确认)或反向算法(患者试样由密螺旋体测试筛选，之后进行非密螺旋体确认)来诊断梅毒。基本上，这两种算法均遵照阳性初始筛选和确认测试进行。

发明内容

本文提供了检测来自怀疑具有梅毒感染的个体的样品中非密螺旋体和密螺旋体抗体的试剂盒。在一些实施方式中，该试剂盒包含(i)被类脂抗原(例如，心磷脂，卵磷脂，胆固醇，或其混合物)包被的固体支持物(例如，微颗粒，珠，或表面如芯片，微滴定板，膜，或玻璃)；和(ii)被苍白密螺旋体抗原包被的固体支持物(例如，微颗粒，珠，或表面如芯片，微滴定板，膜，或玻璃)。在一些实施方式中，(i)和(ii)被包装到相同隔室中(例如，在容器或管中的相同混合物中，或包被在相同表面上，例如ELISA孔的表面上)。在一些实施方式中，(i)和(ii)被包装到分开的隔室中。在一些实施方式中，珠在包含pH缓冲剂(例如，瑞兹姆碱(Trizma)、甘氨酸，磷酸盐)和盐(例如，NaCl)的储存缓冲液中。在一些实施方式中，储存缓冲液还包含离子型或两性离子型去污剂。在一些实施方式中，试剂盒还包含试验缓冲液和/或样品稀释缓冲液。在一些实施方式中，储存缓冲液，试验缓冲液，和/或样品稀释缓冲液缺少非离子型去污剂。

在一些实施方式中，类脂抗原是心磷脂、卵磷脂或胆固醇。在一些实施方式中，苍白密螺旋体抗原是r15、r17、r47、其混合物，或r17和r47的融合体。

在一些实施方式中，试剂盒还包含标记的抗免疫球蛋白(Ig)抗体，例如，抗人Ig抗体。在一些实施方式中，抗-Ig抗体对IgG(例如，人IgG)和/或IgM(例如，抗人IgM)有特异性。在一些实施方式中，标记的抗人免疫球蛋白抗体是结合人IgG和人IgM的抗体偶联物。在一些实施方式中，试剂盒包含IgG特异性的第一标记的抗人Ig抗体和IgM特异性的第二标记的抗人Ig抗体。抗人IgG抗体和抗人IgM抗体可能具有相同或不同的标记物。

在一些实施方式中，试剂盒还包含洗涤溶液或洗涤原液(例如，浓缩或脱水)。在一些实施方式中，洗涤溶液或洗涤原液包含PBS，和任选的离子型、非离子型、或两性离子型去污剂。在一些实施方式中，洗涤溶液具有非离子型去污剂。在一些实施方式中，洗涤溶液缺少非离子型去污剂。