[发明专利]衣壳

说明书

描述了具有与SEQ ID NO：3的序列具有至少98％同一性或与SEQ ID NO：4的序列至少94％同一性的氨基酸序列的AAV衣壳蛋白。还描述了一种药物组合物，包含该衣壳蛋白的AAV衣壳和病毒颗粒，包含编码该衣壳蛋白的核苷酸序列的重组AAV载体和包含该衣壳蛋白或该载体的宿主细胞和转基因动物。另外，还描述了将目的核酸转移到哺乳动物中的方法，其包括将重组AAV载体导入哺乳动物，其中该重组AAV载体包含被包裹到包含该衣壳蛋白的衣壳中的目的基因。

发明领域

本发明涉及腺相关病毒(AAV)衣壳变体。

发明背景

近年来已经开发了基于不同病毒的多个重组基因转移载体。基于腺相关病毒(AAV)的基因转移载体、即AAV载体是优选的，因为它们能够转导不同类型的不同组织的分裂和非分裂细胞的能力，以及建立稳定的长期转基因表达的能力。虽然基于其他病毒例如腺病毒和逆转录病毒的载体可能具有某些期望的特征，但它们也与不期望的副作用相关。基于AAV的基因转移载体尚未检测到此类副作用(Manno et al.,Nature Medicine,12(3):342(2006))。

已经鉴定、克隆、测序并转化为载体的许多AAV血清型。这些血清型包括AAV8、AAV5、AAV3B和最近描述的AAV-LK03(WO2013/029030)。然而，本发明人已经发现许多目前使用的载体在人中具有低的转导率。例如，AAV8载体在人中的转导是小鼠中的二十分之一，以及发生在三分之二的高剂量组群中瞬时、泼尼松龙反应性转氨酶升高(transaminitis)。因此，需要新的AAV载体来提高效能和安全性，并且促进更广泛的临床适用性。

为此，本发明人通过经验交换来自4种不同AAV衣壳的各种结构域已经开发了新的杂合衣壳：(1)AAV8，(2)AAV5，(3)AAV3B和(4)AAV-LK03。开发了与目前使用的载体相比达到至多5倍的基因转移水平的衣壳。

发明概述

在本发明的第一方面，提供了具有与SEQ ID NO：3具有至少98％同一性或与SEQID NO：4具有至少94％同一性的氨基酸序列的AAV衣壳蛋白。

发明人已经出乎意料地发现，该新的衣壳蛋白产生提供比目前使用的AAV载体更高的转导率的衣壳。此外，已经发现，患者中针对该衣壳的抗体的流行率低于一些目前使用的AAV载体。

在一些实施方案中，氨基酸序列与SEQ ID NO：4的序列具有至少95％的同一性。在具体实施方案中，氨基酸序列与SEQ ID NO：4的序列具有至少96％的同一性。在进一步的实施方案中，氨基酸序列与SEQ ID NO：4的序列具有至少97％的同一性。在一些实施方案中，氨基酸序列与SEQ ID NO：4的序列具有至少98％的同一性。在其它实施方案中，氨基酸序列与SEQ ID NO：4的序列具有至少99％的同一性。在具体实施方案中，氨基酸序列具有SEQ IDNO：4的序列。

在一些实施方案中，氨基酸序列与SEQ ID NO：3的序列具有至少98.5％的同一性，优选与SEQ ID NO：3的序列具有至少99％的同一性，更优选与SEQ ID NO：3的序列具有至少99.5％的同一性。在具体实施方案中，氨基酸序列具有SEQ ID NO：3的序列。

在一些实施方案中，氨基酸序列与SEQ ID NO：3的序列具有同一性。在其它实施方案中，氨基酸序列与SEQ ID NO：4的序列具有同一性。在优选的实施方案中，氨基酸序列具有SEQ ID NO：4的序列。更优选地，氨基酸序列具有SEQ ID NO：3的序列。

具有上述氨基酸序列的衣壳蛋白是功能性衣壳蛋白，其可以与其它必需的衣壳蛋白一起形成功能性衣壳。功能性衣壳是可以包围遗传物质，进入细胞并用遗传物质转导细胞的衣壳。确定衣壳是否功能正常在技术人员的能力范围内。例如，以下在本发明的详述中描述的实验可以用于确定衣壳是否可以成功转导细胞。