[发明专利]用于免疫印迹分析的多单元板

说明书

本发明涉及一种多单元板，其中至少一个单元由膜(优选为硝化纤维素或PVDF膜)组成，与支撑结构相关联，可使膜进行电印迹转移。该多单元板适用于高通量免疫印迹分析(包括载通分析)。

技术领域

本发明涉及免疫印迹分析领域，尤其是涉及用于高通量免疫印迹分析的装置和方法。本发明在一个应用中用于以多单元格式进行载通分析的多单元板和方法。

背景技术

本申请案主张2015年5月26日提交的编号为14/721,205的美国非临时专利申请的优先权。上述申请案在此通过引用的方式整体并入本文。

蛋白质分析是现代生物研究的基础。研究生物进程中关键蛋白质因子的表达和调控及其在制药和临床研究中的应用，为疾病发病机理及其预防、诊断和治疗的实验、药物和临床研究提供了重要信息。

最近获得专利的载通技术(US8293487、8563256和8722345)改进了基于免疫印迹分析的传统蛋白质分析方法。虽然在检测前应按传统的免疫印迹分析法分析蛋白质样品，但是在载通分析中还添加了另外的洗脱步骤，以确定测定的特异性。与相关联的抗原结合的抗体或抗体复合物会通过竞争分子特异性地释放到洗脱溶液中。洗脱溶液中洗脱的抗体或抗体复合物的量反映了待分析样品中相关联的抗原的量。洗脱抗体或抗体复合物的总量可直接在溶液中进行定量，这是载通分析相比传统免疫印迹分析方法的另一优点。

与传统的免疫印迹分析方法相比，载通分析针对高通量分析表现出了简单性和适用性的优点，但也对适用的装置提出新的需求，原因是用于传统免疫印迹分析方法的现有装置并非为了满足载通分析的需要(尤其是针对高通量目的)而设计的。

在传统的免疫印迹分析中(以蛋白质印迹分析为代表)，人们已使用了几种类型的膜并针对免疫印迹分析对此类膜进行优化。此类膜包括硝酸纤维素膜和聚偏二氟乙烯(PVDF)膜。

传统的免疫印迹分析需要在与膜上相关联的抗原相结合的抗体或抗体复合物所在的特定印迹上检测到信号。因而要求膜具有平滑性和连续性，以便进行检测结果比较。

相反，在载通分析中，抗体或抗体复合物可通过竞争分子，分别从与相关联的抗原相结合的抗体或抗体复合物所在的特定印迹上释放出来，以便进行定量。显然，在载通分析中，蛋白质样品中的膜不得具有连续性，须彼此分离，以便分别洗脱每个蛋白质样品的抗体或抗体复合物，从而防止信号彼此交叉干扰。

在载通分析中，就膜本身而言，对膜的形状或其他物理特性并无要求，原因是对每个样品信号的检测无需在膜上进行。

多孔板已广泛用于生物化学测定和免疫印迹分析测定(例如，酶联免疫吸附测定(ELISA))。此类多孔板包括6、24、96孔板，甚至1536孔板，也可称为微量滴定板、微板或微孔板。

用于ELISA测定的多孔板通常具有小于1μg/cm2的蛋白结合能力。相比之下，用于传统免疫印迹分析的典型膜(硝酸纤维素或PVDF膜)，均具有100至200μg/cm2的蛋白结合能力。虽然ELISA板在ELISA测定中得以成功应用，但其低蛋白结合能力限制了其在载通分析中的应用。

在最初的免疫印迹分析的中，通过斑点印迹分析，可将抗原直接施用到膜上，并使膜在空气中长时间干燥。这种做法可能不是样品应用的最佳形式，至少在常规做法中，真空被应用于膜上以增加抗原与膜的结合。

在西式印迹分析中，抗原可在电泳阶段被捕获到聚丙烯酰胺凝胶中。将捕获的抗原通过电印迹转移方式(electroblotting)转移到膜上，进行印迹分析。

本发明中，多单元板可适用于载通分析以及将抗原电印迹转移到膜上。因此，本发明提供了针对免疫印迹分析的载通分析中独特需求的解决方案，尤其是在多单元板格式中的应用。同时还明显增加了在电印迹转移的步骤中，与膜结合的抗原的量。

发明内容